Question

12．临床上治疗大面积创伤时，可将经特殊处理的猪皮移植到患者的创面处，并在猪皮上开若干个小口植入患者的自体皮，待其生长并最终替换猪皮．研究表明，导入人P基因的转基因猪提供的“皮肤”可在移植后存活更长时间，能够保证自体皮充分生长．请回答问题：
（1）如果将P基因通过显微注射法直接导入猪受精卵中，一般情况下，猪不会表达P基因，原因是P基因在猪细胞中不能稳定存在并复制和表达，因此需要构建基因表达载体．
（2）操作成功的受精卵品要在无菌无毒的环境中培养，如何创造无菌无毒的环境培养液中添加抗生素创造无菌环境，定期更换培养液创造无毒环境．
（3）通过胚胎移植技术将早期胚胎移入代孕母猪的子宫内，可获得转基因猪．检测猪体细胞中P基因是否表达，在分子水平上采用的检测方法是抗原--抗体杂交技术．
（4）若应用得到的早期胚胎，并从中分离出胚胎干细胞，用于医学硏究和治疗，则这种方法称为治疗性克隆．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定．
2、动物细胞培养的条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物．
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH．
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．

解答 解：（1）基因工程中，目的基因导入动物细胞的受精卵中一般采用显微注射法．一般情况下，直接导入目的基因时，由于P基因在猪细胞中不能稳定存在并复制和表达，猪不会表达P基因，因此需要构建基因表达载体．
（2）操作成功的受精卵品要在无菌无毒的环境中培养，可以造培养液中添加抗生素创造无菌环境，定期更换培养液创造无毒环境．
（3）通过胚胎移植技术将早期胚胎移入代孕母猪的子宫内，可获得转基因猪．检测猪体细胞中P基因是否表达，在分子水平上采用的检测方法是抗原--抗体杂交技术．
（4）若应用得到的早期胚胎，并从中分离出胚胎干细胞，用于医学硏究和治疗，则这种方法称为治疗性克隆．
故答案为：
（1）显微注射    稳定存在并复制和表达
（2）培养液中添加抗生素创造无菌环境，定期更换培养液创造无毒环境
（3）胚胎移植     抗原--抗体杂交技术
（4）胚胎干细胞    治疗性克隆

点评 本题考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关技术，要求考生识记基因工程的操作步骤；识记动物细胞培养的过程及条件；识记胚胎移植的一般程序，再结合所学的知识准确答题．