Question

19．（1）微生物培养中，对培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．在植物组织培养的过程中，也要对外植体等进行一序列的消毒、灭菌处理，并且要求无菌操作，原因是外植体体积小、抗性差、微生物会与外植体争夺培养基中的营养物质（至少答出两点）．
（2）为了从样本中获取某种致病菌单菌落，可用平板划线法或稀释涂布法将样本接种于固体培养基表面，再经过选择培养、鉴别等步骤就可似获得．
（3）根据培养基中出现的菌落数目和稀释倍数计算出细菌数目往往比实际的数目低，原因是当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．
（4）为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的选择（填“选择”或“鉴别”）培养基中加入酚红指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变红色．

Answer 1

分析 1、植物组织培养的过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，愈伤组织再分化形成胚状体，进一步发育植株（新植体）．
2．实验室常用的消毒方法
煮沸消毒；化学药物消毒；紫外线消毒．
3．实验室常用的灭菌方法
①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；
②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；
③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min．
4、微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）微生物培养中，对培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．在植物组织培养的过程中，也要对外植体等进行一序列的消毒、灭菌处理，并且要求无菌操作，原因是外植体体积小、抗性差、微生物会与外植体争夺培养基中的营养物质、微生物有可能产生对组织培养有害的物质等．
（2）为了从样本中获取某种致病菌单菌落，常见的接种方法有平板划线法、稀释涂布法将．
（3）细菌计数，由于两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此根据培养基上出现的菌落数目和稀释倍数计算得出的数目往往比实际数目低．
（4）为检测尿素分解菌的存在与否，在以尿素为唯一氮源的选择培养基中加入酚红指示剂，如果存在尿素分解菌，则指示剂将变红色．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌      外植体体积小、抗性差；微生物会与外植体争夺培养基中的营养物质；微生物有可能产生对组织培养有害的物质（任意答出两条即可）
（2）平板划线       稀释涂布
（3）当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（4）选择     酚红      红

点评 本题主要考查植物组织培养技术、消毒和灭菌的方法、接种方法等知识，意在强化学生对相关实验操作的识记、理解与运用．