Question

16．工厂的污水池含有一种有害的、难以降解的有机化合物A．研究人员用化合物A、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）．实验的主要步骤如图1所示．请分析回答下列问题．

（1）加入化合物A的培养基属于选择培养基．化合物A可为目的菌提供生长所需的C源和N源等营养物质．若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是稀释涂布平板法．
（2）微生物培养过程中，防止杂菌污染的关键技术是防止外来杂菌的污染（无菌技术），为了排除杂菌污染如何设计对照实验不接种的空白培养基，证明培养基制备是否被杂菌污染．
（3）在农业生产研究中，常需要进行微生物的培养和计数．图2是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上有很多注意事项．请列举两项．①每次划线前要灼烧接种环　②冷却后从上一区划线末端开始划　③首尾区不重叠．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、分析图解可知，图1表示稀释涂布平板法，图2表示平板划线法．
3、平板划线操作的注意事项
①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌；
②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种；
③划线时最后一区域不要与第一区域相连；
④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破．

解答 解：（1）根据题意可知，实验需要“筛选到能高效降解化合物A的细菌”，因此加入化合物A的培养基属于选择培养基．根据题干信息可知，该培养基中含有“化合物A、磷酸盐以及微量元素”，由此可以确定，化合物A可为目的菌提供生长所需的C源和N源等营养物质．若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是稀释涂布平板法．
（2）微生物培养过程中，防止杂菌污染的关键技术是防止外来杂菌的污染（无菌技术），为了排除杂菌污染如何设计对照实验不接种的空白培养基，证明培养基制备是否被杂菌污染．
（3）图2是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上有很多注意事项，如：①每次划线前要灼烧接种环　②冷却后从上一区划线末端开始划　③首尾区不重叠．
故答案为：
（1）选择  　  C源和N源      稀释涂布平板法
（2）防止外来杂菌的污染（无菌技术）    不接种的空白培养基，证明培养基制备是否被杂菌污染 
（3）①每次划线前要灼烧接种环　②冷却后从上一区划线末端开始划　③首尾区不重叠

点评 本题考查了微生物分离与培养的有关知识，要求考生能够识记培养基的成分和培养条件，掌握微生物分离与纯化的方法与步骤，再结合所学知识准确答题．