Question

11．人的血清白蛋白（HSA）在临床上需求量很大，通常从人血中提取．但由于艾滋病病毒等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重．如果应用基因工程将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，那么利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白就成为可能．下图表示利用乳腺生物反应器生产人血清白蛋白的过程，图中Tet^r表示四环素抗性基因，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示，请回答以下问题：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
识别序列及切割位点

（1）构建基因表达载体时，需要将人血清白蛋白基因嵌入到启动子和终止子之间，这样人血清白蛋白基因就能在乳腺细胞中表达．
（2）要将人血清白蛋白基因插入质粒中，若只允许使用一种限制酶，那么应选择的限制酶是Sau3AⅠ．
（3）据图分析，筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含氨苄青霉素（填“四环素”或“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培基上进行，原因是用限制酶切割后破坏了Tet^r基因，但不会破坏Amp^r基因，导入重组质粒的受体细胞（对氨苄青霉素具有抗性），能在含氨苄青霉素的培养基上生存下来．
（4）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为，对于该部位，这两种酶都不能（“都不能”或“只有一种能”）切开．
（5）为了获得母奶牛，胚胎移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．若要检测牛奶中是否含有人血清白蛋白，可采用抗原-抗体杂交技术．

Answer 1

分析 分析题图：图示表示利用乳腺生物反应器生产人血清白蛋白的过程，其中①表示将目的基因导入受体细胞的过程；②表示早期胚胎培养过程；③表示胚胎移植过程；④表示妊娠形成转基因牛；⑤表示从转基因牛的乳汁中获取人血清白蛋白．

解答 解：（1）启动子启动转录过程，终止子终止转录过程，因此构建基因表达载体时，需要将人乳铁蛋白基因嵌入到启动子和终止子之间，这样人乳铁蛋白基因就能在乳腺细胞中表达．
（2）根据表中五种酶的识别序列及切割位点可知，限制酶Sau3AI还可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将人乳蛋白基因插入载体，在只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因的情况下，应选择限制酶Sau3AI．
（3）据用限制酶Sau3AI切割后会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此倒入重组质粒的受体细胞可能在含有氨苄青霉素的培养基上生存下来．
（4）根据表格中各种限制酶的识别序列和切割位点可知，若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，这两种酶都不能切开．
（5）为了获得母奶牛，胚胎移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定．检测目的基因是否表达产生相应的蛋白质可采用抗原-抗体杂交技术．
故答案为：
（1）启动子和终止子  
（2）Sau3AⅠ
（3）氨苄青霉素     用限制酶切割后破坏了Tet^r基因，但不会破坏Amp^r基因，导入重组质粒的受体细胞（对氨苄青霉素具有抗性），能在含氨苄青霉素的培养基上生存下来
（4）    都不能
（5）性别鉴定      抗原-抗体杂交

点评 本题结合图表，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具及其特点；识记基因工程的操作步骤，掌握其应用，能根据图中和表中信息选择合适的限制酶，再结合所学的知识准确答题．