题目内容
【题目】青蒿素是最有效的抗疟疾药物，由野生黄花蒿产生。
研究Ⅰ：野生黄花蒿青蒿素产量低，为缓解青蒿素供应不足的状况，料学家将tms基因和如tmr基因导入黄花蒿的愈伤组织从而获得了黄花蒿的冠瘿组织，改造过程用到的部分结构如图。
（1）图中结构P、T是基因成功转录的保证，其中结构P的作用是_____________。在获得转基因的冠瘿组织过程中，构建基因表达载体是核心步骤，在具体操作中常常使用两种能产生不同黏性末端的限制酶对目的基因和运载体进行切割，这样做的好处是_____________。
（2）T-DNA的作用是可以使自的基因进入植物细跑，并插入到植物细胞中染色体的DNA上，要检测目的基因是否插入到冠瘿组织细胞的染色体DNA上，可采用_____________技术。
（3）与愈伤组织相比，冠瘿组织的生长速度更快，原因可能是_____________。
研究Ⅱ：为研究IAA、BL对野生黄花蒿植株侧根生长情况的影响，现将相似的野生黄花蒿均分成若干组，在含有不同浓度的IAA，并且含有或者不含有1nmol/L BL的琼脂粉培养基上垂直生长8天，计算每厘米初生根上侧根的数目，实验结果见图。
IAA浓度（nmol/L）
据图激素组成是_____________的一组其侧根数目作为计算百分比的标准（100%）。IAA浓度为0时，BL对侧根的发育表现为______。IAA对侧根的发育表现为_____________。在5-20nmol/L浓度范围内IAA和BL彼此间表现_____________作用。
【答案】RNA聚合酶识别和结合的部位 保证目的基因和运载体定向连接（避免目的基因和运载体的自身连接成环和反向连接） DNA分子杂交（或PCR） tms和tmr基因编码产物控制合成了生长素和细胞分裂素，促进了冠瘿组织的生长 1nmol/L BL且不含生长素（0 nmol/L IAA） 促进侧根形成 低浓度抑制，高浓度促进 协同
【解析】
基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
Ⅰ：（1）一个完整的基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因、复制原点等。图中结构P、T是基因成功转录的保证，由于T是终止子，则结构P是启动子。启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的部位。在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和运载体的自身连接成环和反向连接，一般选用两种限制酶分别对目的基因、运载体进行切割。
（2）T-DNA的作用是可以使目的基因进入植物细胞，并插入到植物细胞中染色体的DNA上，要检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因可采用DNA分子杂交技术。
（3）图中结构属于目的基因的是tms和tmr，分别编码产物控制合成生长素和编码产物控制合成细胞分裂素。促进了冠瘿组织的生长，所以与愈伤组织相比，冠瘦组织的生长速度更快。
Ⅱ：据图激素组成是1nmol/L BL且不含生长素的一组其侧根数目作为计算百分比的标准（100%）。IAA浓度为0时，含有BL比不含BL的侧根数目更多，说明BL对侧根的发育表现为促进侧根形成。在不含BL这一组可以看出，IAA对侧根的发育表现为低浓度抑制，高浓度促进。在5-20nmol/L浓度范围内IAA和BL均表现为促进作用，彼此间表现协同作用。
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