Question

2012年诺贝尔医学和生理学奖授予英国科学家约翰?戈登和日本科学家山中伸弥．约翰?戈登在20世纪60年代做过一个划时代的实验：把美洲爪蟾的小肠上皮细胞核注入去核的卵细胞，结果发现一部分卵依然可以发育成蝌蚪，其中的一部分蝌蚪可以继续发育成为成熟的爪蟾．山中伸弥等科学家将四个关键基因转入小鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞（iPS），这些干细胞可再转化成老鼠体内任何种类的细胞．回答下列问题：
（1）约翰?戈登之后，科学界利用该技术进行更多细胞核转移实验，复制出多种哺乳类动物．在哺乳动物的核转移实验中，一般通过

 

（物理方法）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂和发育，当胚胎发育到

 

阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内．
（2）从卵巢中吸取的卵母细胞，一般要培养到

 

阶段才能用于实验．
（3）利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植的原因是

 

．
（4）在山中伸弥的实验中，利用了逆转录病毒，该病毒的作用是

 

．
（5）一般情况下，体外扩增目的基因常用的方法是

 

．在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增值，这种现象称为细胞的

 

．要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用

 

处理．

Answer 1

考点：胚胎移植,PCR技术的基本操作和应用,基因工程的原理及技术,动物细胞与组织培养过程

专题：

分析：细胞分化程度越高，全能性越低；由于动物体细胞全能性受限制，因而因此利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植．
外源基因进入受体细胞得通过构建基因表达的载体来实现．构建基因表达的载体除了目的基因外还需要载体、工具酶．载体种类包括：质粒、动植物病毒、噬菌体．

解答： 解：（1）在哺乳动物的核转移实验中，一般通过电脉冲（或电刺激）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂和发育，当胚胎发育到桑葚胚或囊胚阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内．
（2）从卵巢中吸取的卵母细胞，一般要培养到MⅡ中期（减数分裂第二次分裂中期）阶段才能用于实验．
（3）动物细胞分化程度高，不容易恢复全能性，因此利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植．
（4）在山中伸弥的实验中，利用了逆转录病毒，该病毒的作用是目的基因的载体．
（5）一般情况下，体外扩增目的基因常用的方法是PCR技术（多聚酶链式反应）．在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增值，这种现象称为细胞的接触抑制．要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用胰蛋白处理．
故答案为：
（1）电脉冲（或电刺激）  桑葚胚或囊胚
（2）MⅡ中期（减数分裂第二次分裂中期）
（3）动物细胞分化程度高，不容易恢复全能性
（4）目的基因的载体
（5）PCR技术（多聚酶链式反应）  接触抑制   胰蛋白

点评：本题考查了基因工程、细胞工程和胚胎工程等方面的知识，意在考查考生的识记能力，难度适中．考生要能够识记胚胎移植所选用的早期胚胎；识记卵母细胞的准备时期；识记目的基因扩增的方法等．