题目内容
【题目】科研人员利用胚胎干细胞（ES 细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如下图。请回答相关问题:
（1）图1中用到了_________________________等现代生物技术（写三项即可）。
（2）由图1可知，步骤②中要分离出ES细胞，需将重组胚胎培养到______期。将目的基因导入ES细胞而不是上皮细胞，是因为ES细胞在功能上具有__________。
（3）步骤③中，先需要利用 PCR 技术扩增干扰素基因。可以根据________合成引物，图2 A、B、C、D 四种单链 DNA 片段中应选取_______作为引物（DNA 复制方向总是从5′向 3′延伸）。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为_______________。
（4）将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可用的检测物质是____________（填“标记的干扰素基因”或“干扰素的抗体”）。
【答案】 动物细胞培养、动物细胞核移植、早期胚胎培养、基因工程、胚胎干细胞 囊胚期 发育的全能性 一段已知的干扰素基因的核苷酸序列 B 和 C HindⅢ和 PstⅠ或 EcoRⅠ和 PstⅠ 绿 干扰素的抗体
【解析】本题以图文结合为情境综合考查学生对基因工程的基本操作程序、胚胎干细胞的研究与应用等相关知识的识记和理解能力。
(1)图1是利用胚胎干细胞（ES 细胞）对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗的流程，其中过程①采用了动物细胞核移植技术，此前需借助动物细胞培养技术来培养上皮细胞和卵母细胞；过程②运用了早期胚胎培养技术；过程③需借助基因工程技术将目的基因导入ES细胞，在此过程中离不开胚胎干细胞技术。
(2) 图1中的ES细胞是取自于囊胚期的内细胞团。ES细胞在功能上具有发育的全能性，体外诱导ES细胞可以使其向不同方向分化，所以将目的基因导入ES细胞而不是上皮细胞。
(3) 干扰素基因属于目的基因，利用 PCR 技术扩增目的基因时，要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。因DNA复制时，子链总是从5′向 3′方向延伸，子链与模板链反向平行，所以利用PCR技术扩增干扰素基因时，可以从图2的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取B和C片段作为引物。由图2可以看出，用限制酶SmaⅠ切割会破坏干扰素基因，为将完整的干扰素基因切割下来，需要利用限制酶组合HindⅢ和 PstⅠ或 EcoRⅠ和 PstⅠ切割干扰素基因的两端，这样也可以使如图3所示质粒上保留一个完整的标记基因，即绿色荧光蛋白基因。
(4)综上分析，在构建的重组质粒上，红色荧光蛋白基因的结构已经被破坏，但绿色荧光蛋白基因的结构完整，因此将步骤③获得的 ES 细胞在荧光显微镜下观察，应选择只发绿色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，需采用抗原-抗体杂交技术，若有杂交带出现，表明干扰素基因已经成功表达，因此可用的检测物质是干扰素的抗体。
【题目】回答下列与噬菌体侵染细菌实验有关的问题：
（1）1952年赫尔希和蔡斯利用同位素标记完成了著名的噬菌体侵染细菌实验，下图是实验的部分步骤：
写出上述实验的部分操作过程：
第一步：用35S标记噬菌体的蛋白质外壳，如何实现对噬菌体的蛋白质外壳的标记？请简要说明步骤：____________________。
第二步：用35S标记噬菌体与没有标记过的大肠杆菌混合。
第三步：一定时间后，搅拌，离心。
（2）在赫尔希和蔡斯的噬菌体侵染细菌实验中，用32P标记的噬菌体侵染大肠杆菌，在理论上上清液不含有放射性,而实验最终结果显示，在离心液的上层，也有一定的放射性，而下层的放射性比理论值低。
①．在赫尔希和蔡斯的噬菌体侵染细菌实验中，采用的方法是__________。
②．从理论上讲，上清液的放射性应该为0，由于实验数据和理论数据之间有较大的误差，由此对实验过程进行误差
a．在实验过程中，噬菌体与大肠杆菌混合培养，到用离心机分离，这一段时间如果过长，会使上清液的放射性增高，其原因是_______________。
b．在实验中，如果有一部分噬菌体没有侵染到大肠杆菌中去，将会产生误差，理由是___________________。
（3）噬菌体侵染细菌之后，合成新的噬菌体蛋白质外壳需要_________。
A．细菌的DNA及其氨基酸 | B．噬菌体的DNA及其氨基酸 |
C．噬菌体的DNA和细菌的氨基酸 | D．细菌的DNA及其噬菌体的氨基酸 |
（4）上述实验中，不能用15N来标记噬菌体DNA，理由是__________。
