题目内容
图1为几种限制性核酸内切酶识别的序列和切割的位点．如图2，已知某DNA在目的基因的两端1、2、3、4四处有BamHⅠ或EcoRⅠ或PstⅠ的酶切位点．现用PstⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段（假设所用的酶均可将识别位点完全切开），下列各种酶切位点情况中，可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状的是（ ）| 限制酶 | BamHⅠ | EcoRⅠ | PstⅠ |
| 识别序列和切割位点 |  |  |  |
| A、1为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为EcoRⅠ，4为PstⅠ |
| B、1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ，4为PstⅠ |
| C、1为EcoRⅠ，2为PstⅠ，3为PstⅠ，4为BamHⅠ |
| D、1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ |
考点：基因工程的原理及技术
专题：
分析：由于限制酶具有特异性，一种限制酶只能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并形成特定的黏性末端．题干中提出“为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状”，即要求目的基因两侧的黏性末端不同，因此一般选择不同的限制酶进行切割．
解答：
解：A、如果1为EcoRⅠ，2为BamHⅠ，3为EcoRⅠ，4为PstⅠ，用PstⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段，则切割后含有目的基因的片段两侧有相同的黏性末端（1处和3处），会出现自身环化，A错误；
B、如果2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ则切割后含有目的基因的片段两侧有相同的黏性末端（2处和3处），会出现自身环化，B错误；
C、如果2为PstⅠ，3为PstⅠ，则切割后含有目的基因的片段两侧有相同的黏性末端（2处和3处），会出现自身环化，C错误；
D、如果1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ，则切割后含有目的基因的片段两侧有不同的黏性末端（2处和3处），可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，D正确．
故选：D．
B、如果2为EcoRⅠ，3为EcoRⅠ则切割后含有目的基因的片段两侧有相同的黏性末端（2处和3处），会出现自身环化，B错误；
C、如果2为PstⅠ，3为PstⅠ，则切割后含有目的基因的片段两侧有相同的黏性末端（2处和3处），会出现自身环化，C错误；
D、如果1为BamHⅠ，2为EcoRⅠ，3为PstⅠ，4为EcoRⅠ，则切割后含有目的基因的片段两侧有不同的黏性末端（2处和3处），可以防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，D正确．
故选：D．
点评：本题考查了限制酶的特点及应用，在基因工程中，一般为防止质粒或目的基因自身环化，一般选择不同的限制酶分别切割目的基因和质粒，以形成不同的黏性末端．
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B、
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C、
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