Question

【题目】研究人员利用小鼠（2N=40）的单倍体ES细胞（只有一个染色体组），成功培育出转基因小鼠，其主要技术流程如图所示：
注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶，箭头指向的位置为限制酶的切割位置；Amp′是氨苄青霉素抗性基因，Neo′是G418抗性基因．
（1）重组质粒上的抗生素抗性基因可作为 ， 其作用是有利于筛选出含有目的基因的细胞，氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo′的小鼠细胞，结合如图推测，过程①选用的2种限制酶是 （选填图中的编号），图中③处的培养液应添加（填“氨苄青霉素”或“G418”）．
（2）若图中过程①选用的2种限制酶识别序列和切割位置分别是 和 ，则经这两种限制酶切割后所产生的黏性末端是 ， 此时，图中过程②应选用（填“EcoliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）．
（3）据图分析，细胞乙内除线粒体DNA外，还有个DNA分子；细胞乙发育成桑椹胚的过程中细胞分裂方式是 ， 将细胞乙培养成桑椹胚的技术称为技术．

Answer 1

【答案】
（1）标记基因；Ⅰ和Ⅱ；G418
（2）；T4DNA连接酶
（3）40；有丝分裂；早期胚胎培养
【解析】解：（1）重组质粒上的抗生素抗性基因可作为标记基因，其作用是有利于筛选出含有目的基因的细胞．根据题意可知，氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo′的小鼠细胞，因此应选择Neo′作为标记基因，即质粒上Neo′不能用限制酶切割，则过程①应选用Ⅰ和Ⅱ2种限制酶，图中③处的培养液应添加G418．（2）若图中过程①选用的2种限制酶识别序列和切割位置分别是 和 ，前者被限制酶切割形成的是黏性末端，后者被限制酶切割形成的是平末端，即经这两种限制酶切割后所产生的黏性末端是 ，此时，图中过程②应选用T4DNA连接酶．（3）根据题意可知，小鼠的染色体为2N=40，因此单倍体ES细胞的细胞核中染色体有20条，完成减数分裂后的卵细胞中也有20条染色体，即细胞乙内除线粒体DNA外，细胞核中有40个DNA分子；细胞乙发育成桑椹胚的过程中细胞分裂方式是有丝分裂，将细胞乙培养成桑椹胚的技术称为早期胚胎培养技术． 所以答案是：（1）标记基因Ⅰ和ⅡG418（2）

T4DNA连接酶（3）40 有丝分裂 早期胚胎培养
【考点精析】掌握基因工程的原理及技术是解答本题的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重组技术．