题目内容
8.蛋白质是生物体内重要的化合物,实验室提取、分离蛋白质对于蛋白质的研究,应用具有重要意义,请分析回答:(1)若要从红细胞中提取血红蛋白,则要对获得的红细胞进行洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液、透析才能获得含杂质较少的血红蛋白溶液,前两个步骤中使用的液体分别是生理盐水、蒸馏水和甲苯.
(2)用凝胶色谱法分离血红蛋白的过程中,为使凝胶装填紧密,应在约50cm高的操作压下向色谱柱内注入缓冲液,当色谱柱内红色条带接近色谱柱底端时,开始收集流出液,在分离过程中,当观察到红色区带均匀一致地移动时,说明色谱柱制作成功.
(3)装填凝胶柱时,不得有气泡存在,原因是气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果.
分析 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步,包括:样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定.
首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液,即样品的处理;再经过透析去除分子量较小的杂质,即样品的粗分离;然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去,即样品的纯化;最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定.
解答 解:(1)若要从红细胞中提取血红蛋白,则要对获得的红细胞进行洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液、透析才能获得含杂质较少的血红蛋白溶液.洗涤红细胞利用的是生理盐水,红细胞不会破裂,而血红蛋白释放过程中利用蒸馏水和甲苯使红细胞吸水破裂.
(2)用凝胶色谱法分离血红蛋白的过程中,为使凝胶装填紧密,应在约50cm高的操作压下向色谱柱内注入缓冲液,当色谱柱内红色条带接近色谱柱底端时,开始收集流出液,在分离过程中,当观察到红色区带均匀一致地移动时,说明色谱柱制作成功.
(3)装填凝胶柱时,不得有气泡存在,原因是气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果.
故答案为:
(1)洗涤 血红蛋白释放 生理盐水 蒸馏水和甲苯
(2)50 色谱柱底端 红色区带均匀一致地移动
(3)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果
点评 本题考查了蛋白质的提取和分离的实验,要求考生能够掌握实验的原理、方法、步骤等有关知识,掌握在不同步骤中使用的溶液;注意凝胶装填过程总的相关注意点,难度适中.
练习册系列答案
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