题目内容
回答下列有关基因工程的问题（7分）
细菌、真菌等微生物产生的β-葡萄糖苷酶是一种耐热纤维素酶，可分解自然界中的纤维素获得能源。现可通过基因工程将β-葡萄糖苷酶基因（bglB基因）与图28的质粒重组并导入大肠杆菌获得大量有活性的β-葡萄糖苷酶。（质粒中ori为质粒复制所必需的DNA序列，启动子是使转录开始的一段DNA序列，终止子是提供转录终止信号的DNA序列，抗生素抗性基因为标记基因，其余为不同限制酶的酶切位点，切割形成的黏性末端均不相同）
（1）．从高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉品种中提取到相应的RNA，进而获得bglB基因的DNA序列，这种获取目的基因的方法是____________________。
（2）．为避免自身环化并确保bglB基因与图一质粒准确重组，可选用的限制酶是（ ）（2分）
A NdeI和XbaI B NdeI和BamHI
C XbaI D PstI E BamHI
（3）．bglB基因通过 酶与质粒结合形成重组质粒。
（4）．图二培养基中含有刚果红和纤维素，可用于筛选纤维素酶产量高的重组菌，原理如图三。
据此分析，图二中的[ ]菌落即为纤维素酶产量最高的菌株。
（5）．在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高基因的突变率。与用诱变剂直接处理微生物相比，上述育种技术获得热稳定性高的bglB基因的效率更高，其原因是在PCR过程中（ ）（多选，2分）
A．仅针对bglB基因进行诱变
B．bglB基因产生了定向突变
C．bglB基因可快速累积突变
D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
（1）、通过化学方法人工合成
（2）、B
（3）、DNA连接酶
（4）、C
（5）、C
【解析】
试题分析：
（1）.由提取出的RNA获得DNA的方法是逆转录法，属于人工合成目的基因的方法。
（2）.观察题图，目的基因插入质粒时，应该插入启动子和终止子之间，启动子与终止子之间共有三个限制酶切点：NdeI、XbaI、BamHI，由于质粒中XbaI的切点有两个，因此不能用XbaI进行切割，如果只用一种限制酶进行切割，由于两端的黏性末端相同，形成的重组DNA分子有多种，因此应用两种限制酶进行切割，故用NdeI和BamHI进行切割。
（3）.把目的基因与质粒连接起来的酶是DNA连接酶。
（4）.分析图二和图三，可以推知，菌株的纤维素酶产量越高，分解的纤维素越多，菌落周围的透明圈越大，比较四个选项，C菌落纤维素酶产量最高。
（5）PCR技术与微生物培养过程相比，PCR技术过程中DNA的复制速率更快，因此获得热稳定性高的bglB基因的效率更高，故C正确。
考点：本题考查基因工程的有关知识，意在考查考生识图能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。
