题目内容

16．回答下列有关微生物实验室培养的有关问题．
Ⅰ为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表：“+”表示有，“-”表示无）．（注：在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成红色复合物．）
酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR溶液水
培养基甲++++-++
培养基乙+++-+++
（1）据表判断，培养基甲不能（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是液体培养基不能分离单菌落；培养基乙不能（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是乙培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌．
（2）纤维素酶是一类酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三种．
Ⅱ为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作．

（3）图甲所示的是制备固体培养基时的实验操作步骤之一，它称为倒平板，若用该培养基培养大肠杆菌，除考虑营养条件外，还要考虑温度、氧气、pH、无菌、渗透压等 等条件．培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染．对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生．
（4）图乙是平板划线法接种操作示意图，正确的操作顺序是A→B→G→F→E→C→D→H （用字母和箭头表示）；找出图乙中两处错误的操作（用字母表示）C、D．
（6）图丙是某同学用平板划线法接种后的培养基培养12h后的实验结果．若该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出每升水样中的活菌数为3.8×107．

分析 1、平板划线操作：
①挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种．
②划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁，左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁），右手拿接种环先在A区划3-4条连续的平行线（线条多少应依挑菌量的多少面定）．划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果．在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方（不要放入皿盖内），以防止杂菌的污染．
③划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转到上方，接种环通过A区（菌源区）将菌带到B区，随即划数条致密的平行线．再从B区作C区的划线．最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区平行，但划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成．随即将皿底放入皿盖中．烧去接种环上的残菌．
④等平板凝固后，将平板倒置．
2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）分析表格可知，培养基甲为液体培养基，不能用于分离和鉴别纤维素分解菌，纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基．乙培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌，因此乙培养基也不能用于分离和鉴别纤维素分解菌．
（2）纤维素酶是一类酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶三种．
（3）制备固体培养基的步骤为：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，图甲所示为倒平板过程；若用该培养基培养大肠杆菌，除考虑营养条件外，还要考虑温度、氧气、pH、无菌、渗透压等条件．培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染，对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生．
（4）图乙是平板划线法接种操作示意图，根据以上分析可知，正确的操作顺序是A→B→G→F→E→C→D→H；图乙中两处错误：C步骤应该在酒精灯的火焰旁进行；D中最后一区的划线不能与第一区相连．
（6）图丙采用的接种方法是平板划线法；若该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出每升水样中的活菌数为$\frac{39+38+37}{3}$×100×10×103=3.8×107．
故答案为：
（1）不能       液体培养基不能分离单菌落     不能     乙培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌
（2）葡萄糖苷酶
（3）倒平板  温度、氧气、pH、无菌、渗透压等
（4）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
（5）G→F→E→C→D→H      C、D
（6）平板划线法     检测培养基平板灭菌是否合格       3.8×107

点评 本题结合图表，考查微生物的培养和分离，要求考生识记培养基的成分、种类及作用；识记微生物接种常用的两种方法，能结合图中和表中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．

练习册系列答案
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6．如图所示为苹果成熟期有机物质含量的变化图，请据图回答下列相关问题：

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7．利用胡萝卜根获得试管苗的过程中，下列叙述正确的是（　　）
A．为防止微生物污染，实验前应对所有实验材料和用具进行长时间的高压蒸汽灭菌
B．为防止微生物污染，实验全程必须在超净工作台中进行，实验人员应注意无菌操作
C．将胡萝卜组织块接种到培养基上后用不透光锡箔纸封盖瓶口的目的是进行避光培养
D．胡萝卜的人工种子不是胡萝卜试管苗经人工薄膜包装得到的种子
4．在细胞生命活动中，可能发生的过程是（　　）
A．氧气通过主动运输进入线粒体B．DNA从细胞核进入细胞质
C．叶绿体中的ATP进入细胞质基质D．mRNA从细胞核进入细胞质
11．无菌操作是微生物接种技术的关键；传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作．回答下列相关问题：
（1）消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力．消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害．下列哪些事物适用于消毒处理A．
①皮肤　　　②饮用水　　③牛奶　　　④注射器
⑤培养皿⑥接种环⑦培养基⑧果汁   ⑨酱油⑩手术刀
A．①②③⑧⑨B．④⑤⑥⑦⑩C．①②③④⑤⑥⑧D．以上全部
（2）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整pH，接种前要进行高压蒸汽灭菌，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在无菌条件下进行．
（3）图是利用平板划线法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．为达到这一目的，操作上应注意：
①每次划线前要灼烧接种环；
②冷却后从上一区划线末端开始划；
③首尾区不连接（不重叠）．
（4）利用培养基不仅可以分离培养大肠杆菌，也可以进行植物组织培养．与大肠杆菌培养明显不同的是，用于组织培养的培养基中还需要加入植物激素（或生长素和细胞分裂素）．
（5）有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是青霉素杀死了乳酸菌．
1．下列关于生物学实验中所用试剂的说法，正确的是（　　）
A．用双缩脲试剂鉴定蛋白质时，需进行水浴加热
B．用吡罗红染料处理细胞，可以观察到DNA在细胞中的分布
C．用苏丹Ⅲ鉴定花生子叶的脂肪，可观察到橘黄色的颗粒
D．用斐林试剂可鉴定甘蔗细胞中是否含有蔗糖
8．下列关于科学家的研究过程或方法思路正确的是（　　）
A．孟德尔发现了遗传因子并证实了其传递规律和化学本质
B．沃森和克里克提出的DNA规则的双螺旋结构中嘧啶数不等于嘌呤数
C．烟草花叶病毒感染烟草实验说明RNA也能做遗传物质
D．赫尔希和蔡斯用35S和32P分别标记噬菌体的蛋白质和DNA，证明了DNA的半保留复制
5．和“校园内一棵柳树”生命系统层次相同的是（　　）
①一个苹果　
②培养皿中的大肠杆菌菌落　
③一个大肠杆菌
④培养基被污染后，又滋生了除大肠杆菌之外的细菌和真菌．
A．②③B．③C．①D．②
6．如图所示曲线甲、乙表示生长素浓度对同一植物不同器官的影响，A、B、C、D是相对的四个点．下列叙述正确的是（　　）
A．若C点的浓度为植物茎向光侧的浓度，则背光侧的浓度应大于2m
B．AD段说明生长素作用的特点具有两重性
C．若甲、乙分别表示生长素浓度对幼嫩植物和成熟植物的影响，则乙曲线的顶点应该低于甲曲线的顶点
D．除草剂的作用原理可用图中A点表示

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