题目内容
【题目】如图所示为农杆菌转化法示意图。请回答以下问题：
（1）图中①过程用到的工具酶的特点是______________________。
（2）图中②过程用到的工具酶是___________，该过程是基因工程最核心的步骤，即____________。
（3）图中③过程，需使用___________溶液处理农杆菌，处理的目的是使该细菌处于感受态。
（4）图中④过程的原理是___________。
（5）检验基因工程是否成功。首先应检测___________，这是外源基因能否在真核细胞内___________的关键；其次，利用___________法检测目的基因是否转录出相应的mRNA；最后，利用抗原一抗体杂交法检测目的基因是否翻译成蛋白质。
【答案】能识别特定的脱氧核苷酸序列并且在特定位点切割 DNA分子DNA连接酶基因表达载体的构建氯化钙植物细胞的全能性转基因生物的染色体上是否插入外源基因稳定遗传分子杂交
【解析】
图示为农杆菌转化法示意图，图中①是用限制酶切割杂交质粒的T-DNA片段；②是用DNA连接酶将获取的外源基因和切割的质粒连接形成重组质粒，也即是基因表达载体的构建过程，是基因工程的核心步骤；③是将重组质粒导入农杆菌中；④是通过植物组织培养技术将侵染有目的基因的外置体培养成转基因烟草。
（1）根据前面的分析，图中①过程用到的工具酶是限制酶，该酶的特点是能识别特定的脱氧核苷酸序列并且在特定位点切割DNA分子。
（2）图中②过程用到的工具酶是DNA连接酶。基因工程最核心的步骤基因表达载体的构建。
（3）将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法,即用氯化钙溶液处理该细菌,处理的目的是使该细菌处于感受态。所以图中③过程，需使用氯化钙溶液处理农杆菌，处理的目的是使该细菌处于感受态。
（4）图中④过程是植物组织培养过程，其原理是植物细胞具有全能性。
（5）检测基因工程是否成功，首先检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因，这是目的基因能否在真核细胞内稳定遗传的关键；其次，利用分子杂交法检测目的基因是否转录出相应的mRNA；最后，利用抗原-抗体杂交法检测目的基因是否翻译成蛋白质。
