题目内容
下图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素（抗生素）抗性基因，tctR为四环素（抗生素）抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。下图（二）为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：
（1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的 酶；二是将目的基因与运载体拼接的 酶；三是作为运载体的质粒。
（2）将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体（质粒）进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“ ”、“ ”、“ ”三种，其中有效的（所需要的）基因表达载体是 ，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。
（3）利用图（一）所示的质粒拼接形成的3种拼接产物（基因表达载体）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物（基因表达载体）是 。
（4）有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图（一）中的 。在动物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是 。在植物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是 。是因为这种微生物很容易侵染到
中，从而把它的Ti质粒上的 转移到受体细胞染色体的DNA上。
（5）在基因工程中，作用于图（二）所示a位置的酶是 ；作用于b位置的酶是
。
（1）限制酶（限制性核酸内切酶） DNA连接酶
（2）目的—目的基因 目的基因—运载体 运载体—运载体 目的基因—动载体
（3）运载体—运载体和目的基因—运载体
（4）P（启动子） 显微注射法 农杆菌转化法 双子叶植物和裸子植物 T-DNA
（5）限制酶（限制性内切酶） DNA解旋酶。
【解析】略
孟建平名校考卷系列答案
为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。
| 已知 一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对） | 第一步水解 | 产物（单位bp） | 第二步水解 | 产物（单位bp） |
| A切割酶 | 2100 | 将第一步水解分离后，分别用B酶切割 | 1900 200 | |
| 1400 | 800 600 | |||
| 1000 | 1000 | |||
| 500 | 500 | |||
| B酶切割 | 2500 | 将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割 | 1900 600 | |
| 1300 | 800 500 | |||
| 1200 | 1000 200 | |||
| 经A酶和B酶同时切割 | 1900 1000 800 600 500 200 | |||
（1）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为 个和 个。
（2）根据表中数据，请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。
（3）已知BarnH I与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BarnH工和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后 和 序列明显增多。
