限制性内酶I的识别序列和切点是-G↓GATCC-.限制性内切酶II的识别序列和切点是-↓GATC-.在质粒上有酶I的一个切点.在目的基因的两侧各有1个酶II的切点. (1)请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端. (2)请画出目的基因两侧被限制酶II切割后所形成的黏性末端. (3)在DNA连接酶的作用下.上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

限制性内酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶II的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶II的切点。

（1）请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。

（2）请画出目的基因两侧被限制酶II切割后所形成的黏性末端。

（3）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？。

（1）限制酶I切割后黏性末端：

（2）限制酶II切割后黏性末端：

（3）可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）

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分析回答有关生物工程中的问题：

日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：

（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是做为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________

_________。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________ ___。

(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。

(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______ ___ 。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。

(5)在培养重组细胞时，培养液中通常含有_____________、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。

(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出三项）。

日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：

(1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
（5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到酶。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)

下列是基因工程的有关问题，请回答：

（1）限制性核酸内切酶可以识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列，并可以使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的（填化学键名称）断裂，形成的末端总体可分为两种类型，分别是。

（2）目的基因和运载体重组时需要的工具酶是，和限制性核酸内切酶相比，它对所重组的DNA两端碱基序列（有或无）专一性要求。

（3）图l表示构建表达载体时的某种质粒与目的基因。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。

分析可知，最好选择限制酶切割质粒，限制酶切割目的基因所在的DNA，这样做的好处分别是、_ 。

（4）人的肤色正常与白化病受常染色体上基因A和a控制。若白化病型因与相对应的正常基因相比，白化病基因缺失了一个限制酶的切点，甲、乙、丙3人白化基因或相对应正常基因酶切后的电泳结果如图2。

由图2可以判断出，乙和丙的基因型分别是、。如果甲与丙婚配，后代患病的概率为_ ___。

分析回答有关生物工程中的问题：（8分）