题目内容

19.λ噬菌体有极强的侵染能力,能在细菌中快速进行DNA复制,产生子代噬菌体,最终导致细菌破裂(称为溶菌状态);或者整合到细菌基因组中潜伏起来,不产生子代噬菌体(称为溶原状态).在转基因技术中常用λ噬菌体构建基因克隆载体,使其在受体细菌中大量扩增外源DNA,以备研究使用.相关操作如图所示,请回答:

(1)在构建基因克隆载体时,可被噬菌体蛋白质包装的DNA长度约为36~51kb,则经人工改造的λgtl0载体可插入的外源DNA的最大长度为7.6kbkb.为获得较大的插入能力,可删除λ噬菌体DNA组成中的中部(含控制溶原生长)序列以缩短其长度.
(2)构建基因克隆载体时,需用到的酶是限制酶和DNA连接酶.λ噬菌体DNA上通常没有适合的标记基因,因此人工改造时需加装适合的标记基因,如图λgtl0载体中的imm434基因,该基因编码一种阻止λ噬菌体进入溶菌状态的阻遏物.外源DNA的插入位置应位于imm434基因之中(之中/之外),使经侵染培养后的受体菌处于溶菌状态,表明已成功导入目的基因.
(3)合成噬菌体所需的小分子原料主要是氨基酸和脱氧核苷酸.分离纯化噬菌体重组DNA时,将经培养10小时左右的大肠杆菌=噬菌体的培养液超速离心,从上清液(上清液、沉淀物)获得噬菌体.

分析 λ噬菌体DNA中分为三段,左臂是含有编码蛋白质外壳的序列,中臂是控制溶原生长的序列,而右臂是含重要调控序列,所以人工改造载体时,可删除的是中臂.经人工改造λgtl0载体的长度为43.4kb.T2噬菌体侵染细菌的实验步骤:分别用35S或32P标记噬菌体→噬菌体与大肠杆菌混合培养→噬菌体侵染未被标记的细菌→在搅拌器中搅拌,然后离心,检测上清液和沉淀物中的放射性物质.

解答 解:(1)由于组装噬菌体时,可被噬菌体蛋白质包装的DNA最大长度是51kb,经人工改造λgtl0载体的长度为43.4kb,那么插入的外源DNA的最大长度是51-43.4=7.6kb.由于λ噬菌体DNA中分为三段,左臂是含有编码蛋白质外壳的序列,中臂是控制溶原生长的序列,而右臂是含重要调控序列,所以人工改造载体时,可删除中部序列以缩短其长度.
(2)基因工程中需要用到限制酶和DNA连接酶来切割和拼接DNA片段.由于采用的标记基因,即imm434基因,能编码一种阻止λ噬菌体进入溶菌状态的阻遏物,所以外源DNA应该插入该基因之中,这样就使得经侵染培养后的受体菌处于溶菌状态.
(3)噬菌体由蛋白质外壳和DNA组成,因此合成噬菌体蛋白质外壳需要以氨基酸为原料,而合成DNA需要以脱氧核苷酸为原料.分离纯化噬菌体重组DNA时,将经培养10小时左右的大肠杆菌-噬菌体的培养液超速离心,从上清液获得噬菌体.
故答案为:
(1)7.6kb    中部(含控制溶原生长)
(2)限制酶和DNA连接酶   之中      溶菌
(3)氨基酸和脱氧核苷酸     上清液

点评 本题综合流程图,考查基因工程、噬菌体侵染细菌实验的应用,要求考生识记基因工程的工具、操作步骤及应用;识记噬菌体侵染细菌的实验过程,能根据实验现象得出实验结论;同时还要求考生能分析题图提取有效信息答题.

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