题目内容
【题目】回答下列（一）、（二）小题：
（一）菊花组织培养的部分过程如下图：
（1）过程①利用_______（较高/较低）渗透压，使原生质体产量大幅度提高，但存活率却因此而降低，分析降低的原因可能是______________。过程②细胞壁形成后，可逐渐__________渗透压。
（2）幼苗茎段带叶，就会带有_______，也就有了分生组织，所以不通过________阶段就可直接形成丛状苗。过程③应在______________（从具体功能角度）培养基中进行，全过程对光照要求是________。
A.早期每天24h光照，后期每天24h黑暗
B.每天一定时长的光照
C.早期每天24h黑暗，后期每天24h光照
D.每天24h黑暗
（二）请回答下列有关转基因问题：
（1）利用图示质粒和目的基因培育转基因醋化醋杆菌。图中标注了相关限制性核酸内切酶的识别序列和酶切位点，其中酶切位点相同的酶不重复标注。
（1）利用图示质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_____________两种限制酶切割。若用Sau3AⅠ、BclⅠ与许多图示质粒混合，每个质粒将会有1个或多个位点被切开，最多可能获得_______种大小不同的DNA片段。在首次筛选转入了重组质粒的醋化醋杆菌时，可用________取0.1mL醋化醋杆菌悬液，涂布在添加了___________的培养基来筛选。配制该培养基时，通常加入_______来调节渗透压。当成功选出所需菌种进行醋酸发酵时，发酵瓶中的醋化醋杆菌通常用锯末或刨花等材料_________化。
（2）利用转基因技术（目的基因能1个或多个导入并整合到受体细胞染色体上）获得抗虫（E）除草剂（T）的大豆植株甲，若甲自交F1中抗虫抗除草剂：抗虫不抗除草剂：不抗虫抗除草剂=11:4:1.则导入受体细胞的基因E和T分别至少有几个？___________。
A.1、1 B.1、2 C.2、1 D.2、2
【答案】 较高 过度失水损伤/死亡 降低 腋芽/芽 愈伤组织/脱分化 发芽/生芽 B BamHⅠ、HindⅢ 7 移液器/移液管/取样器 四环素 甘露醇 固定 C
【解析】试题分析：本题主要考查植物组织培养、基因工程和基因自由组合定律。要求学生熟知植物组织培养的过程、基因工程中限制酶的选择以及基因自由组合定律的应用。
（一）（1）过程①为菊花幼苗茎切断得到原生质体，可以利用较高的渗透压，但渗透压较高后，会导致细胞过度失水损伤/死亡，从而使原生质体产量大幅度提高，但存活率却因此而降低。因此过程②细胞壁形成后，可逐渐降低渗透压。
（2）幼苗茎段带叶，就会带有腋芽/芽，也就有了分生组织，所以不通过愈伤组织阶段就可直接形成丛状苗。过程③应在发芽培养基中进行，全过程对光照要求是每天一定时长的光照。
（二）（1）质粒若采用BclⅠ限制酶，会破坏全部的标记基因。因此质粒只能采用BamHⅠ、HindⅢ切割。能被BclⅠ识别的序列，也能被Sau3AⅠ识别，两者切割后的末端一致。能被BamHⅠ识别的序列，也能被Sau3AⅠ识别，但两者切割后的末端不一致。因此在质粒中，Sau3AⅠ、BclⅠ存在三个酶切位点，若每个质粒将会有1个或多个位点被切开，最多可能获得7种大小不同的DNA片段，即三个位点全部切割，会有3种，其中两个位点被切割，有3种，一个位点被切割，有1种。在首次筛选转入了重组质粒的醋化醋杆菌时，可用移液器取0.1mL醋化醋杆菌悬液，由于在构建基因表达载体时，破坏了氨苄亲霉素抗性基因，因此应将其涂布在添加了四环素的培养基中筛选。配制该培养基时，通常加入甘露醇来调节渗透压。当成功选出所需菌种进行醋酸发酵时，发酵瓶中的醋化醋杆菌通常用锯末或刨花等材料固定化。
（2）甲自交F1中抗虫:不抗虫=15:1，说明抗虫性状受两对等位基因控制。甲自交F1中抗除草剂：不抗除草剂=3:1，说明抗除草剂性状受一对等位基因控制。
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