丹参酮是从中药丹参中提取的具有抗肿瘤活性的脂溶性菲醌化合物,其作用机制之一是诱导细胞凋亡。以下是相关的实验研究过程及结果:

实验材料:人肝癌细胞(HepG2),培养液,0.02%二甲亚砜溶液,用0.02%二甲亚砜溶解的0.5 ug/mL、1 ug/mL、1.5 ug/mL的丹参酮溶液,培养瓶等。

①将等量的人肝癌细胞(HepG2)悬液,分别接种于若干含有等量培养液的培养瓶中;将培养瓶放于37℃、5%CO2培养箱中培养24 h,静置、去掉上清液;

②______________,再加入等量的培养液,于37 ℃、5% CO2培养箱中继续培养;

③培养72 h,每24 h用细胞计数仪检测癌细胞数。

(1)请完善上述实验步骤中相关内容。____________________________________

(2)本实验的自变量是________________。

(3)设对照组癌细胞增殖率为100%,用下面公式计算各用药组癌细胞增殖率:增殖率(%)=[(用药组各时段癌细胞数-用药组开始癌细胞数)/(对照组各时段癌细胞数-对照组开始癌细胞数)]×100。得到以下数据:

表1 丹参酮对HepG2细胞增殖率的影响 (%)

组别

培养时间/h

24

48

72

对照组

100

100

100

给药组

ug/mL

0.5

78

62

48

1.0

68

26

21

1.5

48

12

5

①请将表中前48 h的数据转化为相应给药组细胞增殖率随时间变化的柱形图。

②通过数据和柱形图分析可以得出丹参酮对HepG2细胞的作用效果的特点是:___________。

(4)将培养48 h的培养液离心,去除上清液后经过一系列的处理及分析,得到对照组和给药组48 h细胞周期变化、凋亡率及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达量如表所示:表2 丹参酮对HepG2细胞周期、凋亡率及凋亡蛋白基因Bax和Bcl-2的表达的影响

组别

G1

S

G2+M

凋亡率

Bax

Bcl-2

对照组

55%

36%

9%

5.6%

28%

53%

实验组

67%

24%

9%

32.6%

37%

38%

据此推测,丹参酮使HepG2细胞周期阻滞于________期。丹参酮可能通过促进HepG2内________的表达来诱导细胞凋亡从而抑制肿瘤的生长。

(5)顺铂(DDP)是一种DNA损伤药物,也是目前临床上多种癌症化疗的首选药物。若要探究丹参酮联合顺铂对HepG2细胞生长的影响,应还需设置_______________________给药组才能得出结论。

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