Question

家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养,可提取干扰素用于制药。

(1)进行转基因操作前,需用 酶短时处理幼蚕组织,以便获得单个细胞。

(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达,需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的 和 之间。

(3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含:扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、 和 。

(4)利用生物反应器培养家蚕细胞时,贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中,这样可以 增加培养的细胞数量,也有利于空气交换。

 

Answer 1

(1)胰蛋白(或胶原蛋白) (2)启动子 终止子

(3)对干扰素基因特异的DNA引物 Taq DNA聚合酶 (4)扩大细胞贴壁生长的附着面积

【解析】(1)利用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织可获得单个细胞。(2)来自cDNA文库中的目的基因不含复制原点、标记基因、启动子和终止子等,故需将该目的基因插入到启动子和终止子之间。(3)PCR技术是在体外高温条件下进行的,需利用热稳定的DNA聚合酶(如Taq DNA聚合酶)。由于DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连接在一个片段上,所以在PCR反应体系中还需加入引物。(4)据题意可知,反应器中放入多孔中空薄壁小玻璃珠可扩大细胞贴壁生长的附着面积,有利于细胞增殖。