Question

16．近年来，癌症等疾病高发，严重影响着人类健康．
（1）海兔素是从黑斑海兔体内分离获得的一种含溴倍半萜，有学者以人肺癌细胞系A549作为体外肿瘤模型，研究了海兔素与TRAIL（肿瘤凋亡诱导因子）对肿瘤细胞的作用．如图1．
①配置动物细胞培养液，同时加入胎牛血清，以满足细胞代谢所需的营养物质及调节因子．
②将A549置于适宜温度条件下培养．待细胞密度达到90%时，加入胰蛋白酶，将细胞分散至单细胞悬液．
③用一定浓度的海兔素、TRAIL处理上述细胞悬液后，采用流式细胞仪计数．
实验中每个浓度的TRAIL处理下都设置了对照，其处理是不添加海兔素，目的是单独研究TRAIL对细胞存活率的影响（排除海兔素对细胞存活率的影响）．根据结果可知，在不同条件组合的处理之下，随着处理浓度的增加，A549肿瘤细胞的存活率均（有不同程度的）下降，这表明，海兔素能够增强（填“增强”或“减弱”）TRAIL的抗肿瘤作用．
（2）肿瘤细胞往往存在对TRAIL作用的抗性，其主要原因是肿瘤细胞内抗凋亡蛋白基因的高表达．为进一步研究海兔素对TRAIL抗肿瘤作用的机制，研究者又进行了相关实验．
用凝胶电泳方法测定相关蛋白质的含量，结果见图2（β微管蛋白为对照）．结果表明，海兔素可能抑制抗凋亡蛋白基因的表达，从而减轻其对TRAIL的抗性．
（3）综上所述，海兔素对于癌症的治疗有一定的效果，且这种作用与时间和剂量呈现出相关性．

Answer 1

分析 分析图1：该实验的自变量有海兔素与TRAIL的浓度，因变量为细胞存活率，并且每个不同TRAIL的浓度下都设置了海兔素为0的空白对照组．根据柱形图中的实验结果可知，随着海兔素与TRAIL的浓度的上升，细胞的存活率均有所下降，可以认为海兔素与TRAIL之间具有协同作用．
图2中比较不同浓度的海兔素对抗凋亡蛋白表达量的影响，与β微管蛋白对比可知，随着时间的推移和海兔素浓度的增加，抗凋亡蛋白表达量逐渐降低．

解答 解：（1）①动物细胞培养所需营养物质与体内基本相同，例如需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然成分．配置动物细胞培养液，加入胎牛血清，以满足细胞代谢所需的营养物质及调节因子．
②原代培养细胞达到一定数目时会出现接触抑制，需要加入胰蛋白酶将细胞分散至单细胞悬液，再进行传代培养．
实验中每个浓度的TRAIL处理下都设置了对照，其处理是不添加海兔素，目的是单独研究TRAIL对细胞存活率的影响（排除海兔素对细胞存活率的影响）．根据结果可知，在不同条件组合的处理之下，随着处理浓度的增加，A549肿瘤细胞的存活率均（有不同程度的）下降，这表明，海兔素能够增强TRAIL的抗肿瘤作用．
（2）图2中比较不同浓度的海兔素对抗凋亡蛋白表达量的影响，与β微管蛋白对比可知，随着时间的推移和海兔素浓度的增加，抗凋亡蛋白表达量逐渐降低，表明海兔素可能抑制抗凋亡蛋白基因的表达，从而减轻其对TRAIL的抗性．
（3）综上所述，海兔素对于癌症的治疗有一定的效果，且这种作用与时间和剂量呈现出相关性．
故答案为：
（1）血清     胰蛋白酶    不添加海兔素     单独研究TRAIL对细胞存活率的影响（排除海兔素对细胞存活率的影响）      均（有不同程度的）下降     增强
（2）抗凋亡蛋白基因的表达
（3）时间剂量

点评 本题考查了与动物细胞培养有关的实验探究，要求考生能够掌握动物细胞培养过程，识记胰蛋白酶在培养过程中的运用，并能够根据实验的柱形图和凝胶电泳图得出相应的实验结论．