Question

12．毛角蛋白Ⅱ型中间丝基因（KIFⅡ）与绒山羊的羊绒质量密切相关．图甲表示含KIFⅡ基因的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图乙是获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程图（MspI、BamHI、MboI、SmaI四种限制性核酸内切酶识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG）．请分析回答：

（1）用SmaI完全切割图甲中DNA片段，其最短的产物含537个bp．图甲中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从隐性纯合子中分离出图甲对应的DNA片段，用Sma I完全切割，产物中不同长度的DNA片段有2 种．
（2）上述工程中，KIFⅡ称为目的基因；为了提高试验成功率，需要通过PCR（聚合酶链反应）技术进行目的基因的扩增，以获得更多的KIFⅡ．
（3）过程①必须用到的工具酶是DNA连接酶；在过程③中，为了获得更多的卵（母）细胞，需用促性腺激素处理成年母绒山羊．
（4）过程④称为核移植，进行过程⑤的最佳时期是桑椹胚期或囊胚期．

Answer 1

分析 分析图甲：图中DNA片段含有2个限制酶SmaⅠ切割位点，可被限制酶SmaⅠ切割产生长度为534+3=537bp、796-3-3=790bp、658+3=661bp的三中DNA片段．
分析图乙：：图示表示获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程图，其中①表示基因表达载体的构建过程，该过程需要限制酶和DNA连接酶；②表示动物细胞培养过程，该过程需要采用胰蛋白酶处理组织块以获得单个细胞；③表示卵母细胞的采集和培养过程；④表示核移植过程；⑤表示胚胎移植过程．

解答 解：（1）SmaI限制性核酸内切酶识别切割的碱基序列CCC↓GGG，由图可知在SmaI的作用下完全切割可得到三个片段，最短的长度为537个bp，图甲中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，则CCC↓GGG的碱基序列就只有一个，所以SmaI只能将DNA片段切为两段．
（2）KIFⅡ属于目的基因，基因的扩增常用PCR技术．
（3）工具酶包括限制酶、DNA连接酶，此处上将目的基因拼接的运载体上，应该用DNA连接酶；促性腺激素能够促进排卵．
（4）过程④是将细胞核导入卵母细胞属于细胞核移植范畴；过程⑤属于胚胎移植，胚胎移植的时期通常在桑椹胚期或囊胚期．
故答案为：
（1）537       2
（2）目的基因     PCR（聚合酶链反应）   目的基因的
（3）DNA连接酶   促性腺激素
（4）核移植   桑椹胚期或囊胚期

点评 本题结合转基因山羊培育过程图，考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记所列知识要点，能准确判断图中各过程的名称，并能在较简单的情境中使用，属于考纲识记层次的考查．