Question

5．苯酚（C₆H₅OH）是广泛存在于化工行业废水中的一种污染物．为了分离和纯化高效分解苯酚的细菌，科研人员进行了如图A所示的实验（实验中的LB培养基能使菌种成倍扩增）．请分析回答：

（1）该实验中锥形瓶、培养皿和接种环等可放入干热灭菌箱中灭菌．与步骤②中培养基的成分相比，步骤③培养基成分的最大区别是以苯酚作为唯一的碳源；步骤④中的培养基成为固体的原因是添加了琼脂．
（2）若经步骤④培养后菌落的分布如图B，则接种时甲、乙、丙三个区域划线的操作顺序依次是甲、乙、丙．多次划线后，最终可得到由1个细胞繁殖而来的单个菌落．
（3）接种时，在第一区域划线后须将接种环灼烧、冷却后再划线，在第二次划线时须从第一次划线的末端开始，这样做的目的是（从上一区域）获取菌种．
（4）步骤④的目的是分离纯化能分解苯酚的菌株；经过步骤⑤培养后，应从残余苯酚浓度最低的培养瓶中再分离、培养目的菌株，若需将获得的菌种长期保存，常采用甘油管藏的方法．

Answer 1

分析 1、灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌．灼烧灭菌适合于接种工具的灭菌，一般来说是在操作过程中金属类的接种工具．干热灭菌适合于玻璃器皿、金属工具的灭菌．高压蒸汽灭菌适合于玻璃器皿、接种工具以及培养基．特别注意培养基的灭菌只能用高压蒸汽灭菌．
2、微生物的营养物质有5类，分别是水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子．
3、从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．筛选菌株的过程要使用选择培养基，操作过程中要注意无菌操作，常用的固体培养基上接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法．微生物计数可用稀释涂布平板法和血球计数板计数法．

解答 解：（1）干热灭菌适合于玻璃器皿、金属工具的灭菌，该实验中锥形瓶、培养皿和接种环等可放入干热灭菌箱中灭菌．为了分离和纯化高效分解苯酚的细菌，与步骤②中培养基的成分相比，步骤③培养基成分的最大区别是以苯酚作为唯一的碳源；步骤④中的培养基成为固体的原因是添加了凝固剂琼脂．
（2）利用平板划线法接种时，由图可知，划线顺序应为甲→乙→丙，最终可以得到由一个细胞繁殖而来的单个菌落．
（3）接种时，在第一区域划线后须将接种环灼烧、冷却后再划线，在第二次划线时须从第一次划线的末端开始，这样做的目的是（从上一区域）获取菌种．
（4）步骤④的目的是分离纯化能分解苯酚的菌株；由于该菌株能够分解苯酚，因此经过步骤⑤培养后，应从残余苯酚浓度最低的培养瓶中再分离、培养目的菌株，若需将获得的菌种长期保存，常采用甘油管藏的方法．
故答案为：
（1）锥形瓶、培养皿和接种环    碳源   琼脂
（2）甲、乙、丙     1
（3）灼烧、冷却    （从上一区域）获取菌种
（4）分离纯化能分解苯酚的菌株    最低   甘油管藏

点评 本题主要考查微生物的筛选与分离与微生物的计数等知识，意在加强学生对相关知识点的识记与理解．