题目内容
【题目】家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可提取干扰素用于制药。
(1)进行转基因操作前，需用___________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。
(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入载体质粒的启动子和___________之间。
(3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、引物 和_________________。
(4)将目的基因导入动物细胞最常用的方法是_______________。此方法的受体细胞多是______________。
(5) 将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养时需要提供气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是____________所必需的，CO2的主要作用_______________；培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的________________，以防培养过程中的杂菌污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
【答案】 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 终止子 TaqDNA聚合酶（耐高温DNA聚合酶） 显微注射 受精卵（卵母细胞） 细胞代谢 维持培养液的pH 抗生素
【解析】本题考查基因工程和动物细胞培养等知识，要求考生能理解基因工程的基本操作程序，理解动物细胞培养的条件和技术要点，进行准确答题。
(1)动物细胞培养技术中，常用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）酶动物组织，以便获得单个细胞。
(2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入载体质粒的启动子和终止子之间。
(3)PCR技术的原理是体外DNA复制，PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、引物 和TaqDNA聚合酶（耐高温DNA聚合酶）。
(4)将目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注射，此方法的受体细胞多是受精卵（或卵母细胞）。
(5)动物细胞大规模培养时需要提供气体环境，即95%空气＋5%CO2。其中O 2是细胞代谢（有氧呼吸）所必需的，CO2的主要作用维持培养液的pH；培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的杂菌污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
【题目】下面是某中学生物兴趣小组所做的DNA粗提取和鉴定的实验。
第一步:将一定量的鲤鱼卵巢或_______放在烧杯中,并加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,然后过滤,得到滤液;
第二步:对滤液进行去除杂质的处理;
第三步:将去杂处理的滤液进行再次过滤,得到新的滤液;
第四步:在新的滤液中加入等量的体积分数为95%的酒精溶液,静置2~3分钟,溶液中会析出一些____色丝状物;
第五步:利用这些析出物进行如下的鉴定性实验操作(如下表所示):
| A试管 | B试管 |
第1步 | 加入物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液5 mL | 加入物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液5 mL |
第2步 | 加丝状物并搅拌 | 不加丝状物 |
第3步 | 加4 mL二苯胺,混匀 | 加4 mL二苯胺,混匀 |
第4步 | 沸水浴5 min | 沸水浴5 min |
实验现象 | ① | ② |
实验结论 | ③ | |
(1)完成实验步骤和表格中空白处的实验内容。
(2)对A试管,完成第1、2、3步的操作后溶液颜色如何?____________。
(3)在沸水中加热的目的是,同时说明DNA较耐_____温,待试管冷却后观察颜色的变化,冷却的目的是_____。
(4)B试管在实验中的作用是什么?_____。
(5)A试管中溶液颜色的变化程度主要与__________有关。