Question

【题目】请分析以下资料，并回答问题。

资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”。

资料乙：科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的“鼠—人”嵌合抗体，用于癌症治疗。

（1）据资料甲，为扩增出大量的目的基因（牛生长激素基因）需用到PCR技术。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是____________；PCR扩增时退火温度的设定是成败的关键，如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_______________________________。

（2）据资料甲，目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是____________________________________________；导入前需构建基因表达载体，表达载体含有牛生长激素基因及其启动子等，其中启动子的作用是___________________________。

（3）据资料乙，鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与___________融合，形成____________细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。与植物原生质体的融合相比，动物细胞融合在诱导融合方法方面的主要区别是还常用__________________诱导融合。

（4）)在制备单克隆“鼠—人”嵌合抗体过程中要进行两次筛选，第一次筛选的目的是_________________________；第二次筛选的目的是__________________________。

Answer 1

【答案】加热至90～95℃??? 降低退火温度（或重新设计引物，或其它合理答案）??? Taq酶热稳定性高，而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活??? 提供RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录??? 骨髓瘤细胞??? 杂交瘤??? 灭活的病毒??? 获得杂交瘤细胞??? 获得能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞???

【解析】

1、基因工程的操作步骤：获取目的基因（基因文库获取、PCR、人工合成等）；构建基因表达载体（含目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点）；把目的基因导入受体细胞（动物-显微注射法；植物-农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法；微生物-钙离子处理法）；目的基因的检测和鉴定（分子水平和个体水平）。2、单克隆抗体的制备（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。（2）获得杂交瘤细胞①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。（3）克隆化培养和抗体检测。（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。

（1）在体外利用PCR技术扩增目的基因时，利用DNA的高温变性加热至90-95℃，破坏双链之间的氢键，使DNA解链变为单链。如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有降低退火温度、重新设计引物等。
（2）目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是：PCR技术需要高温加热，Taq酶热稳定性高，而大肠杆菌DNA聚合酶在高温下会失活。启动子的作用是提供RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录。
（3）鼠源杂交瘤抗体就是从免疫的小鼠脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，并通过体内培养或体外培养生产的单克隆抗体。动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用诱导剂（物理方法和化学方法）外，还可以采用灭活的病毒（生物方法）进行诱导。
（4）制备单克隆抗体时要经过两次筛选，第一次筛选的目的是获得杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是获得能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
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