Question

20．某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材枓，测定药物对体外培养细胞的毒性．供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞．请回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是血清可以提供动物细胞所需的一些位置的营养成分．细胞培养应在含5%的CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的作用是维持培养液的PH．
（2）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长停止．药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更多．若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用
胰蛋白酶消化处理．
（3）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素．
（4）已知癌细胞X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入Y，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的mRNA或蛋白质合成水平的差异，确定Y的药效．

Answer 1

分析 1、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．
2、动物细胞培养的条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物．
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH．
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．

解答 解：（1）动物细胞培养技术是单克隆抗体技术的基础．通常在合成培养基中加入适量血清，原因是血清可以补充合成培养基中缺乏的物质，细胞培养应在含5%CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的作用是维持培养液pH．
（2）甲细胞为肿瘤细胞，已经失去接触，而乙细胞为正常肝细胞，存在接触抑制，因此在这两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长停止．胰蛋白酶能消化组织细胞间的蛋白质，使组织细胞分散成单个细胞．
（3）培养瓶中加入抗生素可以抑制细菌的活动．
（4）已知基因X表达与肝肿瘤的发生密切相关，而基因X的表达包括转录和翻译两个步骤，抗癌药物Y的作用可能是抑制基因X的转录过程，也可能是抑制其翻译过程，因此通过分别检测基因X在A、B两组细胞中的mRNA或相关蛋白质合成水平的差异，可以确定Y的药效．
故答案为：
（1）血清可以提供动物细胞所需的一些位置的营养成分    维持培养液的PH
（2）停止  胰蛋白酶                   
（3）抗生素
（4）mRNA   蛋白质

点评 本题以药物试验为背景，考查癌细胞的主要特征、动物细胞培养、探究实验，要求考生识记动物细胞培养的过程及动物细胞培养的条件；识记癌细胞的主要特征；明确实验的目的，理解实验的原则，能结合转录和翻译的过程答题．