Question

【题目】下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。请回答下面问题：

（1）经过HAT培养基选择培养的细胞，还需要进一步培养和筛选。筛选过程通常通过“有限稀释法”完成，具体做法是：将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到适宜浓度，再向细胞培养板（如图）的每个孔中滴加适量的稀释液，其概率为每孔内落入一个细胞，从而能达到____________的目的；培养一段时间后取上清液，上清液能与____________结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，继续进行有限稀释，重复若干次，直到确信每孔中增殖细胞为单克隆细胞。

（2）将所选的细胞在体外条件下进行大规模培养，培养过程中应严格控制无菌无毒的环境。其中，要控制无菌环境应进行的操作有______________________________、________________________。

（3）在培养细胞的过程中，细胞内合成的特异性抗体通过____________方式排出细胞，该过程____________（填“需要”或“不需要”）膜上蛋白质的参与。

（4）单克隆抗体用作体外诊断试剂，可以高效准确地进行人类疾病和动植物病害的诊断和病原鉴定。其原理是______________________________。

Answer 1

【答案】单一细胞培养以保证抗体纯度（或克隆化培养） 特定抗原 对培养液和培养用具进行无菌处理 向培养液添加一定量的抗生素 胞吐 不需要 单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确识别各种抗原的细微差异，并和特定抗原发生特异性结合

【解析】

将特定的抗原注射小鼠，筛选出产生抗体的淋巴细胞，与骨髓瘤细胞融合，转移到HAT培养基中培养，未融合的细胞死亡，而杂交瘤细胞存活，杂交瘤细胞分开培养，选育出产生高特异性抗体的细胞。

（1）为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/ml，每孔滴入0.1ml细胞稀释液，其目的是使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（或单一细胞培养以保证抗体的纯度）；培养一段时间后取上清液，上清液能与特定抗原合的培养孔为阳性孔。

（2）通过对培养液和培养用具进行无菌处理，控制无菌环境。

（3）特异性抗体化学本质是蛋白质，以胞吐方式排出细胞，胞吐的过程需要消耗能量，但不需要载体蛋白的协助。

（4）单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确识别各种抗原的细微差异，并和特定抗原发生特异性结合，所以单克隆抗体用作体外诊断试剂，可以高效准确地进行人类疾病和动植物病害的诊断和病原鉴定。