Question

【题目】人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程：

下图1和2中分别是构建重组质粒的质粒和目的基因，其上标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。下表是几种限制酶识别序列及其切割位点。

请回答下列问题：

⑴质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有______、_______（答出两点即可）。

⑵用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用__________两种限制酶切割，选择不同限制酶切割的目的是________________。

⑶DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有________和________。

⑷为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。

⑸将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。

⑹从受精卵到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是_________。在胚胎移植前，通过_______技术可获得较多胚胎。

⑺若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。

Answer 1

【答案】能自我复制 具有标记基因 Bcl I和Hind Ⅲ 避免质粒和目的基因的自身环化和随意连接 E．coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 超数排卵 获能（处理） 显微注射法 性别鉴定 （早期）胚胎培养 胚胎分割 htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

【解析】

基因工程的操作步骤：获取目的基因；构建基因表达载体；把目的基因导入受体细胞；目的基因的检测和鉴定。

胚胎移植指将雌性动物体内的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。

（1）质粒作为载体，要求具备能够自我复制、具有标记基因等特点。

（2）用图中质粒和目的基因构建重组质粒时，不能选择BamHⅠ和Sau3AⅠ进行切割，会破坏质粒上的2个标记基因；故应选用Bcl I和Hind Ⅲ两种限制酶切割；用不同限制酶切割产生不同的黏性末端，可以避免质粒和目的基因的自身环化和随意连接。

（3）常见的DNA连接酶有E．coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。

（4）对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵，以获取更多的卵（母）细胞。采集的精子需要经过获能处理，才具备受精能力。

（5）常用显微注射法将重组表达载体导入受精卵。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定，选择雌性。

（6）体外受精后，需要采用早期胚胎培养获得早期胚胎。在胚胎移植前，可以通过胚胎分割可获得较多胚胎，需要注意将内细胞团分割均匀。

（7）要检测是否目的基因成功表达，可以采用抗原抗体杂交法，若出现杂交带，在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到htPA，说明目的基因成功表达。