题目内容

【题目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值,只能从人血浆中制备。图一是以基因工程技术获取重组 HSA 的两条途径,其中报告基因表达的产物能催化无色物质 K 呈现蓝色。图二为相关限制酶的识别序列和切割位点,以及 HAS 基因两侧的核苷酸序列。据图回答下列问题:

(1)在构建基因表达载体时,我们常常用不同的限制酶去切割目的基因和运载体来获得不同的黏性末端,原因是_____。依据图一和图二分析,在构建基因表达载体时下列叙述错误的是____

A.应该使用酶 B 和酶 C 获取 HSA 基因

B.应该使用酶 A 和酶 B 切割 Ti 质粒

C.成功建构的重组质粒含 1 个酶 A 的识别位点

D.成功建构的重组质粒用酶 C 处理将得到 2 个 DNA 片段

(2)PCR 技术应用的原理是_____,在利用该技术获取目的基因的过程中,以从 生物材料中提取的 DNA 作为模板,利用_________寻找 HSA 基因的位置并进行扩增。

(3)图一过程①中需将植物细胞与_______________________混合后共同培养,旨在让__________________整合到植物细胞染色体 DNA 上;除尽农杆菌后,还须转接到含_____的培养基上筛 选出转化的植物细胞。

(4)图一③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞,采用最多,也是最为有效的方法是_____。

(5)为检测 HSA 基因的表达情况,可提取受体细胞的_____,用抗血清 白蛋白的抗体进行杂交实验。

【答案】防止目的基因和质粒自身环化和反向连接 C DNA(双链)复制 引物 农杆菌 T-DNA 无色物质K 显微注射技术 蛋白质

【解析】

基因工程技术的基本步骤是:目的基因的获取;基因表达载体的构建:是基因工程的核心步骤,基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等;将目的基因导入受体细胞:根据受体细胞不同,导入的方法也不一样;目的基因的检测与鉴定。

(1)在构建基因表达载体时,常用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒,获得不同的黏性末端,以防止目的基因和质粒自身环化和反向连接(或使目的基因定向连接到载体上);

A、由图中DNA序列和酶切位点序列可知应使用酶B和酶C切割获取HSA基因,A正确;
B、导入的目的基因时应在T-DNA上,因此Ti质粒应用酶A和酶B切割,因为酶A和酶B切出的黏性末不能互补配对,可以将目的基因连接进去,B正确;
C、据图一图二分析可知,成功建构的重组质粒上不再有酶A的识别位点,C错误;
D、成功构建的重组质粒用酶C处理能得到2个DNA片段,应是A-C,和C-A片段,D正确。
故选C。
(2)PCR技术应用的原理是DNA(双链)复制,在利用该技术获取目的基因的过程中,以从生物材料中提取的DNA作为模板,利用引物寻找HSA基因的位置并进行扩增。
(3)图一过程①中需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养,利用农杆菌的侵染特性,让T-DNA整合到植物细胞染色体DNA上;除尽农杆菌后,为了筛选出转化的植物细胞,利用重组质粒上的报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色的特性,进行筛选,故还须将植物细胞转接到含无色物质K的培养基上。
(4)图一③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞,通常采用较多的方法是显微注射技术。
(5)为检测HSA基因的表达情况,可利用抗原抗-体杂交技术,具体做法是:提取受体细胞的蛋白质,用抗血清白蛋白的抗体做杂交实验。

练习册系列答案
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【题目】回答下列问题(一)、(二)

(一)回答与微生物发酵有关的问题:糖化酶,又称葡萄糖淀粉酶,它能把淀粉从非还原性末端水解α-1,4-糖苷键产生葡萄糖,也能缓慢水解α-1,6-糖苷键,转化为葡萄糖。多应用于酒精、淀粉糖、味精、抗菌素、 柠檬酸、啤酒等工业生产。糖化酶是由某菌种经深层发酵提炼而成。

(1)要获得高产糖化酶菌株,需要从含____________土壤中采集样品,制备成菌悬液,采用__________法在以____________为唯一碳源的培养基上对菌株进行初步筛选得到单菌落。此操作需要在________进行。

(2)若要选出透明圈直径与菌落直径比值大的高产菌株,还需要通过紫外线进行诱变处理,在诱变过程中要确定诱变的适当剂量,如________(写出1点即可)。

(3)镇江香(陈)醋主要采用糯米为主料,精选优良菌种,经过淀粉糖化、酒精发酵和醋酸发酵三个主要过程酿造而成的色、香、味俱佳的酿造陈醋。陈醋在生产中往往先进行酒精发酵的原因是_______。醋的风味与酿制过程中发酵的温度和时间、______等有关(写出任意两点)。

(二)回答与植物克隆有关的问题:玉米A具有高产、抗病等优良性状,为使其获得抗除草剂性状,操作流程如下图,其中人为整合上去的报告基因可在筛选检测目的基因是否导入起作用。回答下列有关问题。

(1)Ti质粒上的报告基因在农杆菌内不能获得相应的蛋白质产物,在受体植物细胞中则可以,可能的原因是_______。步骤①中为防止酶切产物自身环化,构建表达载体需用2种限制酶,选择的原则________

①质粒内,每种限制酶只有一个切割位点

②酶切后,Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

③G基因编码蛋白质的序列中,每种限制酶只有一个切割位点

④酶切后,G基因形成的两个黏性末端序列不相同

A.①③ B.①④ C.②③ D.②④

(2)农杆菌感染愈伤组织时,T-DNA携带的G基因易转移到受体细胞____上,然后除尽农杆菌,再使用含________的培养基得到植株B。整个过程中影响玉米愈伤组织能否成功再生植株的原因除了环境因素和培养基的成分之外,还可能有______(答出两点即可)。

(3)上图操作流程的玉米幼胚到植株B的过程中,不同培养基的区别主要在于植物生长调节剂的浓度不同,过程④⑤分别选择_______、_______(填下表中的培养基类型甲或乙),写出表中“……"处的信息____

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