Question

如图为DNA分子的切割和连接过程：
（1）EcoRI是一种

 

酶，其识别序列是

 

，切割点是G与A之间的

 

键．切割结果产生的DNA片段末端形式为

 

．
（2）不同来源的DNA片段结合需要的酶是

 

连接酶，此酶是通过在G与A之间形成磷酸二酯键，而起到“缝合”作用的．还有一种连接平末端的连接酶是

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：1、限制酶主要从原核生物中分离纯化出来，能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种．
2、DNA连接酶根据来源不同分为两类：E．coliDNA连接酶、T₄DNA连接酶，这二者都能连接黏性末端，此外T₄DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低．DNA连接酶连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键．

解答： 解：（1）EcoRI是一种限制酶，其识别序列是GAATTC，切割点是G与A之间的磷酸二酯键．切割结果产生的DNA片段末端形式为黏性末端．
（2）不同来源的DNA片段结合需要的酶是E?coliDNA连接酶，此酶是通过在G与A之间形成磷酸二酯键，而起到“缝合”作用的．还有一种连接平末端的连接酶是T₄DNA连接酶．
故答案为：
（1）限制　           GAATTC         磷酸二酯      　黏性末端
（2）E?coliDNA　   T₄DNA连接酶

点评：本题知识点简单，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程使用的工具酶，掌握其特点，再结合所学的知识准确答题，属于考纲识记层次的考查．要注意，获取目的基因和切割载体时使用同种限制酶，目的是产生相同的黏性末端．获取一个目的基因需限制酶剪切两次，共产生 4个黏性末端或平末端．限制酶切割位点的选择必须保证标记基因的完整性，以便于检测．