Question

2．请选出下列正确的操作步骤（　　）
①土壤取样                ②称取10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中
③吸取0.1mL进行平板涂布    ④依次稀释至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷稀释度．

• A． ①②③④
• B． ①③②④
• C． ①②④③
• D． ①④②③

Answer 1

分析 分离分解尿素的细菌的过程是：1．土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样．先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中．
2．制备培养基
准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用．由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为10³～10⁷．每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基，因此共需要15个选择培养基，5个牛肉膏蛋白胨培养基．此外，还需要准备8个灭菌的试管和1个灭菌的移液管．
3．微生物的培养与观察
将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中（锥形瓶体积为250 mL），充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有9 mL的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至10⁷稀释度，并按照由10⁷～10³稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作．按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管．
将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养．随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生．比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录．
挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否产生颜色反应．
4．细菌的计数
当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数．在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目

解答 解：分离分解尿素的细菌的过程是：①土壤取样→②称取10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中→④依次稀释至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷稀释度→③吸取0.1mL进行平板涂布．C正确．
故答案为：C．

点评 本题主要考查微生物的分和培养，意在强化学生对细菌的培养条件和分离过程的识记与理解．