绿色荧光蛋白基因(GFP)被发现以来.一直作为一个监测完整细胞和鲴织内基因表达及蛋白质位置的理想标记.请根据图表回答下列问题. (1)若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是-TCGA-.N端伸出的核苷酸的碱基序列是-TGCA-.则在构建含该GFP的重组质粒A时.应选用的限制酶足③过程需要的酶是． (2)④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

题目内容

绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和鲴织内基因表达及蛋白质位置的理想标记。请根据图表回答下列问题。

（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的碱基序列是—TGCA—，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用的限制酶足③过程需要的酶是____．

（2）④过程将基因表达载体导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是。

（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可采用技术进行检测。

（4）图中猪的卵母细胞应处于________期，此时在显微镜下可观察到在卵黄膜和透明带之间有

个极体。用于核移植的导入了基因表达载体的猪胎儿成纤维细胞一般都选用传代10代以内的细胞的原因是____ 。

（5）由重组细胞培育得到绿色荧光转基因克隆猪过程中涉及到的现代生物技术手段有，生殖方式为____ 。

（6）假如该过程得到了一个早期胚胎，为了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法，分割时应选择_ ___或囊胚。对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意。得到绿色荧光转基因克隆猪（雌性）之后，可用处理，使之超数排卵，提高其繁育能力。

（1）HindⅢ和PstⅠ（2分） DNA连接酶（2分）

（2）显微注射技术（2分）

（3）DNA分子杂交

（4）ＭⅡ中（ＭⅡ） 1 10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型

（5）早期胚胎培养和胚胎移植无性生殖

（6）桑椹胚将内细胞团均等分割促性腺激素

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我国科学家发现，弯曲的蚕丝由于弯折处容易断裂，其强度低于由蜘蛛纺绩器拖牵丝的直丝，并首次在世界上通过转基因方法将“绿色荧光蛋白基因”和“蜘蛛拖牵丝基因”拼接成功插入蚕丝基因组中，并在受体细胞中得到成功表达。

（1）这项基因工程的操作中，目的基因是，绿色荧光蛋白基因的主要目的是。

（2）在基因工程中，若选出的目的基因共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸有460个，放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是个。

（3）若限制性内切酶A的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶B的识别序列和切点是—↓GATC—。则限制性内切酶A切割质粒形成的黏性末端是，若在DNA连接酶的作用下，上述两种限制性内切酶切割后形成的黏性末端是否能够连接。

（4）下列关于生物工程中酶的作用的叙述中，错误的是（）

A．纤维素酶可用于植物体细胞杂交

B．胰蛋白酶可用于动物细胞培养

C．限制性内切酶只能用于提取目的基因

D．DNA连接酶只能用于DNA的拼接重组

日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：

(1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
（5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到酶。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)

分析回答有关生物工程中的问题：（8分）
日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：

（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是做为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________
_________。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________                              ___。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______              ___                           。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。
(5)在培养重组细胞时，培养液中通常含有_____________、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出三项）。

日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：

(1)图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性核酸内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端：__________________________________________________。

(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是________________________________。

(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________________。

(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________________。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)

④表达出蓝色荧光蛋白

（5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤，第一步是“变性”,这一步骤如果发生在细胞内，是在的作用下完成的；第二步是退火；第三步是“延伸”，需要用到酶。

(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________________等。(至少答出三项)

分析回答有关生物工程中的问题：（8分）

日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图．据图回答：

（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是做为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶I的识别序列和切点是—G’GATCC—，请画出质粒被限制酶I切割所形成的黏性末端的过程：________________________

_________。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是_______________ ___。

(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_______________________。

(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是（用数字表示）：_______ ___ 。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。

(5)在培养重组细胞时，培养液中通常含有_____________、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。

(6)以上培育过程中应用到的生物技术有_________________________________等（至少答出三项）。

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