Question

【题目】人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的利用价值．为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究．

（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是（ ）（多选）
A.酒精灯
B.培养皿
C.显微镜
D.无菌水
E.接种环
（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是 ．
（3）刚果红（CR溶液）可以与纤维素形成红色复合物，不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应．表是两种培养基的配方，“+”表示有，“﹣”表示无．

	酵母膏	无机盐	淀粉	纤维素粉	琼脂	CR溶液	水
培养基甲	+	+	+	+	﹣	+	+
培养基乙	+	+	+	﹣	+	+	+

据表判断，培养基甲能否用于分离和鉴别纤维素分解菌？回答并说明理由；培养基乙能否用于分离和鉴别纤维素分解菌？回答并说明理由 ．
（4）研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落（如图1）．图中降解圈大小与纤维素酶的有关．图中降解纤维素能力最强的菌株是 ．
（5）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株A和B，在不同温度和pH条件下进行发酵测得发酵液中酶活性（Ug﹣1protein）的结果如图2，推测菌株更适合用于人工瘤胃发酵，理由是 ．

Answer 1

【答案】
（1）CE
（2）培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果
（3）不能，没有琼脂，液体培养基无法分离和鉴别菌种；不能，没有纤维素粉作为（唯一）碳源
（4）量和活性；菌2
（5）B；发酵过程中会产热和产酸，B菌在较高温度和酸性环境下酶的活性更高
【解析】解：（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，需要使用酒精灯对涂布器进行灭菌，倒平板需要使用培养皿，稀释菌液需要使用无菌水，涂布平板时需要使用涂布器，不需要使用接种环，也不需要使用显微镜．故选：CE．（2）在涂布平板时，由于培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，所以滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多．（3）据表分析，培养基甲没有琼脂，液体培养基无法分离和鉴别菌种，不能用来分离和鉴别纤维素分解菌．培养基乙捕食以纤维素为唯一碳源的选择培养基，不能用来进行分离和鉴别纤维素分解菌．（4）在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落，降解圈大小与纤维素酶的多少和活性有关．纤维素酶的量越多，活性越强，分解的纤维素越多，透明降解圈越大，所以图中降解纤维素能力最强的菌株是菌2．（5）据图2分析，发酵过程中会产热和产酸，B菌在较高温度和酸性环境下酶的活性更高，所以菌株B更适合用于人工瘤胃发酵．
故答案为：（1）CE（2）培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果（3）不能，没有琼脂，液体培养基无法分离和鉴别菌种 不能，没有纤维素粉作为（唯一）碳源（4）量和活性 菌2（5）B 发酵过程中会产热和产酸，B菌在较高温度和酸性环境下酶的活性更高
微生物培养的关键是无菌操作．微生物培养过程中除考虑营养条件外，还要考虑pH、温度和渗透压等条件，需对培养基和培养皿进行消毒．可以通过稀释涂布平板法或显微镜计数法进行统计计数．
刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌．刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入，也可以在菌落形成后加入．若在细菌菌落形成前倒平板时加入刚果红，则所加刚果红要进行灭菌，以防杂菌的侵入，影响纤维素分解菌菌落的形成；若在菌落形成后加入刚果红，则不需要灭菌．