Question

1．Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞．科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗．其技术流程如图：

（1）步骤①中所选的卵母细胞应处于减数第二次分裂中（MⅡ中）期．
（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团分离出ES细胞，ES细胞在形态上表现为体积小、细胞核大、核仁明显的特点．
（3）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的表达载体（重组质粒）．可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段．为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点．

Answer 1

分析 分析题图：图示是利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗的过程图解，其中①表示核移植过程，②表示早期胚胎培养过程，③表示采用基因工程技术将目的基因导入受体细胞．

解答 解：（1）步骤①中所选的卵母细胞应处于减数第二次分裂中（MⅡ中）期．
（2）胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）．胚胎干细胞在形态上表现为体积小、细胞核大、核仁明显的特点．
（3）将目的基因导入受体细胞时，需要先构建含有Rag2基因的表达载体（重组质粒）．可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段，则所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点，可使目的基因两端的黏性末端与运载体两端的黏性末端相同，这样可将该片段直接连接到表达载体．
故答案为：
（1）减数第二次分裂中（MⅡ中）    
（2）内细胞团      体积小、细胞核大、核仁明显
（3）表达载体（重组质粒）     引物      PCR　    HindⅢ和PstⅠ

点评 本题结合图解，综合考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题；识记核移植的具体过程；识记体外受精的具体过程及早期胚胎发育的过程，能结合所学的知识准确答题．