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转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下图表示四种限制酶的识别序列及酶切位点。

(1)若要获得抗病基因，能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割？________，说明理由_________ 。

要获得含抗病基因的重组质粒能否用PstⅠ、ApaⅠ限制酶切割质粒？________。

(2)卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有________基因，作为标记基因。

(3)②、③阶段是否可使用同种培养基？________；理由是______ 。

(4)④阶段是否可使用不添加植物激素的培养基？________；理由是_______ 。

【解析】　(1)由图示知抗病基因为目的基因，构建表达载体时必须保持目的基因的完整性即不受破坏，而图示的限制酶SmaⅠ则切割抗病基因的中段导致抗病基因被损坏，因此不能用此限制酶对抗病基因进行切割。

(2)表达载体构建时必须的一个构成是载体上应该有标记基因，以鉴定受体细胞是否导入了目的基因，由此可推出如果香蕉细胞导入了抗病基因，且导入的载体上含有抗卡那霉素，则此细胞置入含卡那霉素的培养基上才会正常生长。

(3)②阶段为愈伤组织，③阶段为胚状体或丛芽，当两个阶段培养基中生长素高于细胞分裂素时，主要诱导组织脱分化和根原基的形成；当两个阶段培养基中细胞分裂素高于生长素时，则主要诱导组织再分化和芽原基的形成。

(4)④为试管苗，此时发育形成的幼嫩的芽、根尖等产生生长素以促进根的生长。

【答案】　(1)不能　对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构　不能　(2)抗卡那霉素　(3)不能　2个阶段培养基中生长素与细胞分裂素的比值不同　(4)可以  因为芽能产生生长素促进根的生长

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回答有关生物工程的问题。

转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示。图中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点。下表示四种限制酶的识别序列及酶切位点。

⑴若要获得抗病基因，能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割？_____，说明理由______________________________________________________________。要获得含抗病基因的重组质粒能否用PstⅠ、ApaⅠ限制酶切割质粒？________。
⑵卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长。欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有___________基因，作为标记基因。
⑶利用组织培养技术能将香蕉组织细胞培育成植株，这是因为香蕉组织细胞具有__________，图中①→②、②→③依次表示香蕉组织细胞的___________和_____________的过程。
⑷②、③阶段是否可使用同种培养基？ _________；
理由是____________________________________________________________________。
④阶段是否可使用不添加植物激素的培养基？_________；理由是_____________________。

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点。

下图是转基因抗病香蕉的培育过程，含目的基因的外源DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

(1) 用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaI酶切割，原因是__________________________________________。
(2) 构建含目的基因的重组质粒A时，选 用 BamhHI 和HindⅢ酶对_______和 _______进行切割，可以防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化。
(3) ①?⑤中存在碱基互补配对的是____________。
(4) 香蕉组织细胞具有__________，因此，可以利用组织培养技术将导入目的(抗病)基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中④、⑤依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的_________、____________。培养皿中的培养基除添加营养物质外，还需要添加_________和__________以诱导外植体完成④、⑤生理过程，培养成完整的植物体。在形成愈伤组织的过程中，细胞的新陈代谢类型是_____________。
(5) 如何检测图示过程最终是否取得成功？____________________________。

（10分）转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有Pst I、Sma I、EcoR I、Apa I等四种限制酶切割位点。请回答：

（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶            ，对         进行切割。
（2）培养板中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养板筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有          ，作为标记基因。
（3）香蕉组织细胞具有            ，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的                   。

（9分）转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答：                                                       

（1）香蕉组织细胞具有              ，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的             、                 。
（2）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用的限制酶                              ，
对                                       进行切割。
（3）一个基因表达载体A的组成，除了抗病基因、启动子、终止子外，还必须含有                     ，以便将导入了抗病基因的细胞筛选出来。
（4）有人认为，转基因产品也是一把双刃剑，甚至可能带来灾难性的后果，请你列举出一个可能出现的灾难性后果的实例：
____________________________________________________。

转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答：

（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶      ，对             进行切割。

（2）培养板中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有        ，作为标记基因。

（3）香蕉组织细胞具有           ，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的        。

 

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