Question

7．基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，包括以下几个环节：目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定．回答下列相关问题：
（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即人工合成和从生物材料中分离．如果利用某植物为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两者相比cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少（多/少）．
（2）在构建基因表达载体时，经常使用质粒载体作为基因工程的工具，其应具备的基本条件有能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点（答出两点即可）．除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子．启动子是RNA聚合酶识别并结合的部位．这一步骤中通常还会利用到DNA连接酶，常见的有E•coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是T₄DNA连接酶．
（3）将目的基因导入受体细胞时，如果受体为植物细胞，采用最多的方法是农杆菌转化法，如果受体为动物细胞，采用最多的方法是显微注射技术．
（4）最后，要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，经常采用的检测方法是DNA分子杂交技术．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即人工合成和从生物材料中分离．cDNA文库和基因文库的比较表：

文库类型	cDNA	基因组文库
文库大小	小	大
基因中启动子	无	有
基因中内含子	无	有
基因多少	某种生物的部分基因	某种生物的全部基因
物种间的基因交流	可以	部分基因可以

由此客家，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少．
（2）作为基因工程的运载体应具备的基本条件有：能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点等．除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子，其中启动子是RNA聚合酶识别并结合的部位．构建基因表达载体时，需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA，DNA连接酶根据来源不同分为E•coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是T₄DNA连接酶．
（3）将目的基因导入植物细胞采用农杆菌转化法，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．
（4）最后，要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，经常采用DNA分子杂交技术．
故答案为：
（1）人工合成    少
（2）能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点      RNA聚合     T₄DNA连接酶
（3）农杆菌转化法    显微注射技术
（4）DNA分子杂交技术

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的概念、原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能构建知识网络，再结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．