Question

9．草甘膦的除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡．但它的使用有时也会影响到农作物的正常生长．目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦．
（1）将图1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有4种DNA片段．

（2）假设图1中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图1中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并获得所需重组质粒吗？能 请说明理由切割后露出的黏性末端相同．
（3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒D
A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开      B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开
C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开  D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开
（4）要想检测导入的EPSPS基因是否表达，在分子水平上可用抗原-抗体杂交方法进行检测．

Answer 1

分析 1、“分子手术刀”--限制性核酸内切酶（限制酶）
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的．
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性．
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端．
2．“分子缝合针”--DNA连接酶
（1）根据酶的来源不同分为两类：E．coliDNA连接酶、T₄DNA连接酶．
（2）DNA连接酶连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键．

解答 解：（1）图①中，从苏云金杆菌的DNA被HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后形成3种DNA片段．而质粒被HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后形成2种DNA片段，其中有1种与目的基因相同，所以反应管中有4种DNA片段．
（2）据图分析，由于BamHⅠ和BclⅠ切割DNA后露出的黏性末端相同，质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为限制酶BclⅠ的碱基序列，用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，用BamHⅠ和HindⅢ切割目的基因，仍能获得重组质粒．（3）根据酶切位点和识别的碱基序列可知，重组质粒只能被能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开．（4）图中②过程所用的酶为DNA连接酶，作用部位为两个核苷酸之间的磷酸二酯键．
（4）检测目的基因是否在受体细胞内表达的分子水平上的检测是向分泌物中加入抗体，通过抗原-抗体特异性结合形成杂交带加以检测，如果能形成说明表达，如果不能形成说明没有表达．
故答案为：
（1）4
（2）能    切割后露出的黏性末端相同
（3）D
（4）抗原-抗体杂交

点评 本题以转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图为载体，考查基因工程的相关知识，意在考查考生的识图能力、理解能力和应用能力，属于中等难度题．