题目内容
【题目】乙型脑炎病毒（JEV）是一种 RNA 病毒，病毒的 E 蛋白参与病毒复制过程。研究人员利用基因重组的方法构建了二种新型 JEV 疫苗：DNA 疫苗和 E 蛋白疫苗。图示主要流程。
【1】过程①为_____；过程②所需要的酶是_____。
【2】研究发现：受体细胞为大肠杆菌或酵母菌时，所形成的 E 蛋白结构不完全相同。原因是 。
A.大肠杆菌无细胞核，酵母菌有细胞核可进行基因转录
B.大肠杆菌无膜结构的细胞器，无法对蛋白质进一步加工
C.两种受体细胞在基因表达时所使用的密码子不同
D.两种受体细胞在基因表达时所遵循的碱基互补配对原则不同
【3】关于 DNA 疫苗的叙述，正确的是
A.分子较小，结构较稳定B.能通过 PCR 技术增加生产量
C.能激活机体产生特异性免疫D.DNA 疫苗已广泛用于人工免疫
如图表示N 质粒和成功导入 E 蛋白基因的质粒 EN。为筛选含 EN 的菌落，可用含不同抗生素： 氨苄青霉素和四环素的平板培养基进行筛选，现得到 A、B、C 三类菌落，生长情况如表 。（‘+’代表生长，‘-’代表不生长）
平 板 菌 落 | A | B | C |
无抗生素 | + | + | + |
氨苄青霉素 | + | + | - |
四环素 | + | - | - |
氨苄青霉素+四环素 | + | - | - |
【4】表 中无抗生素平板培养基的作用是_____。另三种培养基属于下列选项中的_____。
A．固体培养基 通用培养基 B．固体培养基 选择培养基
C．液体培养基 通用培养基 D．液体培养基 选择培养基
【5】据图 和表判断， 。
A.A 菌落细胞被导入了N 质粒B.B 菌落细胞被导入 EN 质粒
C.C 菌落细胞未被导入任何质粒span style="width:63.77pt; display:inline-block; -aw-tabstop-align:left; -aw-tabstop-pos:207.65pt">D.两种抗生素均能抑制 E 蛋白表达
【答案】
【1】 逆转录 DNA连接酶、限制酶（限制性核酸内切酶）
【2】B
【3】ABC
【4】 对照 B
【5】ABC
【解析】
基因表达载体的基本结构包括复制原点、目的基因、标记基因、启动子、终止子等。根据题干信息和图形分析，P0是载体质粒，其含有的氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr）都属于标记基因，可以用检测目的基因是否导入受体细胞；EcoRV酶为限制酶，其切割质粒后悔破坏了四环素抗性基因（tetr）。
【1】乙型脑炎病毒RNA经逆转录可得①cDNA；将E蛋白基因和P质粒连接需用②限制酶和DNA连接酶。
【2】大肠杆菌属于原核生物，酵母菌属于真核生物，由于大肠杆菌没有膜结构的细胞器，无法对蛋白质进一步加工，故当受体细胞为大肠杆菌或酵母菌时，所形成的E蛋白结构不完全相同。
【3】DNA疫苗属于基因，分子较小，结构较稳定，能通过PCR技术增加生产量，还能通过转录和翻译表达出相应的产物，引起免疫反应。
【4】P0是载体质粒，其含有的氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr）都属于标记基因，可以用检测目的基因是否导入受体细胞，表中无抗生素平板培养基的作用是对照作用，另三种培养基属于属于选择培养基。
【5】根据表格分析，A类菌落在氨苄青霉素和四环素的培养基中都能够生长，说明其导入的是N；B类菌落在氨苄青霉素的培养基中能生长，C类菌落在任何抗生素的培养基中都不能生长，说明其没有导入任何质粒，两种质粒中含有氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr），能表达产生相应的抗生素，但E蛋白基因的表达与两种抗生素无关。
解答本题的关键是识记并理解基因工程的四个基本步骤，尤其是对核心步骤-构建基因表达载体步骤的理解，明确基因表达载体的几个必须的成分及其作用，进而结合题干要求分析答题。
