题目内容
【题目】下图是制备抗埃博拉病毒VP40蛋白的单克隆抗体的过程：
（1）若要体外获得大量的VP40基因，可采用_______技术进行扩增，若该目的基因循环扩增3次，理论上需要消耗_______个引物。
（2）过程①中选用EcoRⅠ和XhoⅠ两种限制酶切割的优点是____________________，此外还要用到________酶。
（3）过程②中首先需要用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于________，VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为____________。
（4）与植物原生质体融合相比，过程④特有的诱导融合的方法是用____________处理。通常在选择培养基中需加入__________，目的是防止培养过程中的污染。选择培养基上存活的杂交瘤细胞产生的抗体________(填“是”或“不是”)单克隆抗体，对杂交瘤细胞还需要进行_________培养和_______________，最终获得单克隆抗体。
（5）上述克隆技术_________（填“能”或“不能”）体现动物细胞的全能性，_____________技术体现了动物细胞核的全能性。
【答案】PCR 14 防止自身环化 DNA连接 感受态 转化 灭活的病毒 抗生素 不是 克隆化 抗体检测（专一抗体阳性检验） 不能 动物体细胞核移植
【解析】
上图表示转基因技术生产埃博拉病毒蛋白疫苗以及用VP40蛋白作为抗原注射到小鼠体内，引起小鼠的免疫反应，然后提取相应的浆细胞与骨髓瘤细胞融合制备单克隆抗体的过程。过程①为VP40基因表达载体的构建，过程②是将该基因表达载体导入大肠杆菌体内，过程③是利用大肠杆菌生产VP40蛋白。过程④为浆细胞与骨髓瘤细胞的融合过程。
（1）采用PCR技术可扩增大量的目的基因片段，引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始复制，PCR技术运用了DNA复制的原理，因此目的基因扩增3代后产生子代DNA分子23，含16条链。又由于亲代DNA分子的两条链中不含引物，因此需要消耗23×2-2=14个引物。
（2）用限制酶EcoRⅠ和XhoⅠ切割产生不同末端，可防止目的基因和运载体自身环化，保证了目的基因和质粒的定向连接，另外还需要DNA连接酶构建磷酸二酯键将黏性末端的接口进行连接。
（3）用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于感受态，使基因表达载体更容易进入大肠杆菌内。VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为转化。
（4）与植物原生质体融合相比，诱导动物细胞融合特有的诱导融合的方法是用灭活的病毒处理。为防止培养过程中杂菌的污染，通常在选择培养基中加入抗生素。从小鼠体内提取的B淋巴细胞不止一种类型，故筛选得到的杂交瘤细胞产生的抗体不是单克隆抗体，故还要经筛选，得到的细胞还需转移至多孔培养板中进行再次筛选。即对杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养和抗体检测，最终获得单克隆抗体。
（5）上述克隆并没有形成动物个体，故不能体现动物细胞的全能性，动物体细胞核移植技术体现了动物细胞核的全能性。
