Question

10．复合型免疫缺陷症（SCID）患者缺失ada基因，利用利用现代生物工程技术将人正常ada基因转入患者自身T细胞，可改善患者的免疫功能．如图显示该过程的主要步骤，回答下列问题：
（1）图中所示获取正常ada基因的方法是从基因文库中获取目的基因，基因文库包括基因组文库和cDNA文库．若要大量获取该目的基因，可通过PCR技术迸行扩增．PCR技术是利用DNA复制的原理，将基因的核苷酸序列不断加以复制．
（2）与细胞内DNA复制过程相比，PCR技术的不同点有：需要热稳定DNA聚合酶作为催化剂将引物与目的基因DNA单链结合，另一个不同之处表现在温度控制方面，在PCR中先用90～95℃左右高温处理的目的是使DNA变性（解旋），而这一过程在细胞内是通过解旋酶的催化作用实现的．
（3）将人正常ada基因转入患者自身T细胞进行治病的方法叫做基因治疗．
（4）步骤②是构建基因表达载体（重组DNA）．在该步骤中，病毒DNA作为运载体起作用，需使用的工具酶有限制酶和DNA连接酶．

Answer 1

分析 1、细胞中DNA复制与PCR技术的比较：

		细胞内DNA复制	体外DNA扩增（PCR）
不同点	解旋	在解旋酶作用下边解旋边复制	80～100℃高温解旋，双链完全分开
	酶	DNA解旋酶、DNA聚合酶	TaqDNA聚合酶
	引物	RNA	DNA、RNA
	温度	体内温和条件	高温
相同点		①需提供DNA模板 ②四种脱氧核苷酸为原料 ③子链延伸的方向都是从5'端到3'端

2、分析题图：图示显示基因疗法的两个关键步骤，其中①表示获取目的基因，②表示构建基因表达载体．

解答 解：（1）基因文库包括基因组文库和部分基因文库，如cDNA文库；PCR技术的原理是DNA复制．
（2）与细胞内DNA复制过程相比，PCR技术的不同点有：需要热稳定DNA聚合酶作为催化剂将引物与目的基因DNA单链结合，另一个不同之处表现在温度控制方面，在PCR中先用90～95℃左右高温处理使DNA变性（解旋），而这一过程在细胞内是通过解旋酶的催化作用实现的．
（3）将人正常ada基因转入患者自身T细胞进行治病的方法叫做基因治疗．
（4）步骤②是构建基因表达载体．在该步骤中，病毒作为运载体起作用；构建基因表达载体时，首先需要限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，其次需要DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子．
故答案为：
（1）cDNA文库     　DNA复制
（2）热稳定 　   　使DNA变性（解旋）　  　解旋酶
（3）基因治疗
（4）构建基因表达载体（重组DNA）　运载体     限制酶和DNA连接酶

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、概念、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节．