Question

【题目】嗜热土壤芽胞杆菌产生的β一葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶。为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验。如图为质粒限制酶酶切图谱，如表为几种限制酶的识别序列及酶切位点。请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	NdeⅠ
识别序列 及切割位点	G↓GATCC	A↓AGCTT	G↓AATTC	CA↓TATG

（1）通常情况下，获得的目的基因需要进行扩增，最简便的方法是_____技术。

（2）分析图，可选择_____和_____两种不同的限制酶切割质粒，以防止质粒自身环化。质粒被切割后，可用_____将其与目的基因连接。在动物基因工程中将目的基因导入受体细胞时通常的方法是_____。

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_____。

（4）蛋白质工程是二代基因工程，它的基本途径是：从预期的蛋白质功能出发→_____→_____→找到相对应的脱氧核昔酸序列。

Answer 1

【答案】PCR NdeⅠ BamHⅠ DNA连接酶 显微注射法 转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶 设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）扩增目的基因最简单的方法是PCR技术。

（2）用限制酶切割质粒时，选择的限制酶不可以破坏质粒上的标记基因、复制原点、启动子、终止子等必须的结构，且切割后目的基因插入的位点必须在启动子与终止子之间，所以分析质粒结构，可以选择的限制酶为NdeⅠ和BamHⅠ；质粒被切割后，可用DNA连接酶将其与目的基因连接。在动物基因工程中，将目的基因导入受体细胞时通常的方法是显微注射法。

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶。

（4）蛋白质工程的基本途径是从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核昔酸序列。