Question

17．在农业生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数．
（1）如图是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．

（2）分析下面培养基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O．若此培养基用于培养分解尿素的细菌，除应除去上述成分中的NaNO₃外，还需加入尿素和葡萄糖物质，以补充氮、碳源．
（3）应用稀释涂布平板法进行计数的结果通常比实际结果小的原因是不同活菌形成的菌落相互重叠，若在稀释倍数为10⁶的培养基中测得平板上菌落数的平均值为233，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布 平板时所用稀释液的体积为0.2mL）1.165×10⁹．
（4）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？不能，为什么？因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程．

Answer 1

分析 1．分离菌株的思路
（1）自然界中目的菌株的筛选
①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找．
②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的．
（2）实验室中目的菌株的筛选
①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度．pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长．
培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素．配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌．
2．统计菌落数目的方法
（1）稀释涂布平板法（间接）
①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数．
（2）利用显微镜直接计数
3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素．
4．实验流程：土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定

解答 解：（1）接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，图中采取的是平板划线法；该方法能把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．
（2）培养分解尿素的细菌，其氮源是尿素，所以培养基中要除去含氮物质，即去除NaNO₃，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源．
（3）由于两个或多个细菌连在一起时，在平板上观察到的是一个菌落，因此应用稀释涂布平板法进行计数的结果通常比实际结果小；根据题意可知，每克样品中的菌落数=平板上菌落数的平均值÷体积×稀释倍数=233÷0.2×10⁶=1.165×10⁹．
（4）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，由于不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程，因此不能肯定该大肠杆菌的品系被污染了．
故答案为：
（1）平板划线   稀释
（2）尿素和葡萄糖    氮、碳
（3）不同活菌形成的菌落相互重叠    1.1 65×10⁹
（4）不能      因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程

点评 本题考查微生物的分离和培养、测定某种微生物的数量等知识，要求考生识记培养基的成分和微生物的接种方法，并能准确判断图中的接种方法；能采用稀释涂布平板法对微生物进行计数，并能对实验结果进行分析和简单的计算．