Question

10．白细胞介素是一类淋巴因子．研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母细胞中，使其分泌出有活性的白细胞介素．
（1）在体液免疫过程中，白细胞介素是由T淋巴细胞分泌的，可作用于受到抗原刺激的B细胞，使B细胞增殖，分化、形成浆细胞和记忆细胞．
（2）从健康人体外周静脉血分离得到淋巴细胞，于37°培养48h，提取细胞总RNA，生成cDNA．根据已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通过PCR扩增获取目的基因，此时需要加入物质与生成cDNA时所加物质不同的是模板cDNA、引物、耐高温（热稳定）DNA聚合酶（Taq酶）．
（3）用两种限制酶EcoR1与EcoR52处理载体和目的基因后，用DNA连接酶处理，形成重组载体．该载体与细胞膜上载体的化学本质分别是DNA和蛋白质．
（4）将重组载体导入酵母细胞，在培养液中培养一段时间后，收集菌液离心取上清液（上清液/菌体）进行产物鉴定．若要统计培养液中酵母菌的活菌数目，常用的方法是稀释涂布平板法．
（5）利用纯化的产物进行细胞培养实验，可研究人白细胞介素对于促进淋巴细胞增殖（抑制肿瘤细胞增殖）的作用．

Answer 1

分析 分析题图：图示表示基因表达载体的构建过程，载体和目的基因都有限制酶EcoRⅠ与EcoR52的切割位点，所以切割载体和目的基因时用限制酶EcoRⅠ与EcoR52，再用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组载体．

解答 解：（1）白细胞介素是一种淋巴因子，在体液免疫过程中，是由T细胞分泌的；B细胞能增殖、分化形成浆细胞和记忆细胞．
（2）以RNA为模板合成cDNA称为逆转录（反转录），该过程需要模板（RNA）、酶（逆转录酶和DNA聚合酶）、原料（脱氧核苷酸）和能量．采用PCR技术扩增获取目的基因时需要模板（cDNA）、酶（热稳定DNA聚合酶）、原料（脱氧核苷酸）、引物．因此，根据已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通过PCR扩增获取目的基因，此时需要加入的反应物与生成cDNA时所加反应物不同的是：模板cDNA、耐高温（热稳定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物．
（3）构建基因表达载体时，需先用两种限制酶EcoR1与EcoR52处理载体和目的基因后，再用DNA连接酶处理，形成重组载体．该载体的化学本质是DNA，而细胞膜上载体的化学本质是蛋白质．
（4）将导入重组载体的酵母细胞培养一段时间后，收集菌液进行离心，应取上清液进行产物鉴定（白细胞介素属于分泌蛋白）．若要统计培养液中酵母菌的数目可采用抽样检测法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法统计的是活菌数目．
（5）白细胞介素可治疗癌症，因此可推知白细胞介素可抑制肿瘤细胞的增殖．因此利用纯化的产物进行细胞培养实验，可研究人白细胞介素抑制肿瘤细胞增殖的作用．
故答案为：
（1）浆细胞和记忆
（2）耐高温（热稳定）DNA聚合酶（Taq酶）
（3）DNA连接    DNA 和蛋白质
（4）上清液    稀释涂布平板法
（5）促进淋巴细胞增殖（抑制肿瘤细胞增殖）

点评 本题结合图解，综合考查免疫、基因工程、PCR技术、微生物的培养和分离等知识，要求考生识记人体免疫细胞的组成及特异性免疫过程；识记基因工程的工具及操作步骤；掌握纯合微生物的方法，能运用所学的知识答题．