题目内容
普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短．为了培育新的棉花品种，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，成功获得转基因棉花品种，具体过程如下．（启动子是基因的一个组成部分，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性．）请分析回答：（1）①和②过程中所用的限制性内切酶分别是
（2）③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体．用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、9.45kb四种长度的DNA片段，则用NotⅠ酶切反义基因表达载体可获得
（3）导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达，其意义是
考点：基因工程的原理及技术
专题：
分析：分析题图：图示为转基因棉花的培育过程．①是纤维细胞E6启动子和质粒1形成重组质粒2的过程；②是重组质粒2和β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）形成正义表达载体和反义表达载体的过程；③是扩增、鉴定、筛选出反义表达载体导入农杆菌细胞的过程；④利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程；最后再采用植物组织培养技术获得转基因棉花植株．
解答：
解：（1）纤维细胞E6启动子两侧是限制酶HindⅢ和BamHⅠ的切割位点，且用这两种限制酶切割可以去除花椰菜病毒启动子，因此过程①中所用的限制性内切酶是HindⅢ、BamHⅠ；β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）两侧都是限制酶SmaⅠ的切割位点，因此②中所用的限制性内切酶是SmaⅠ．
（2）正、反义基因表达载体总长度相等，NotⅠ酶切位点在目的基因中的位置不一样，因此只用NotⅠ酶切反义基因表达载体可获得两种长度的DNA片段，即5.95+0.05=6.0kb、9.45+3.25=12.7kb．
（3）因为在普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短．而导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与棉花细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达，其意义是阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纤维更长．
故答案为：
（1）HindⅢ、BamHⅠSmaⅠ
（2）2 6.0kb、12.7kb
（3）阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纤维更长
（2）正、反义基因表达载体总长度相等，NotⅠ酶切位点在目的基因中的位置不一样，因此只用NotⅠ酶切反义基因表达载体可获得两种长度的DNA片段，即5.95+0.05=6.0kb、9.45+3.25=12.7kb．
（3）因为在普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短．而导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与棉花细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达，其意义是阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纤维更长．
故答案为：
（1）HindⅢ、BamHⅠSmaⅠ
（2）2 6.0kb、12.7kb
（3）阻止β-甘露糖苷酶合成，使棉纤维更长
点评：本题结合转基因棉花的培育过程图，考查基因工程、植物组织培养等知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤，能根据图中信息选择正确的限制酶；掌握限制酶的作用特点，能运用所学的知识结合题图答题．
练习册系列答案
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下列关于运载体的叙述中，错误的是（ ）
| A、与目的基因结合后，实质上就是一个重组DNA分子 |
| B、质粒是一种独立于细菌染色体外的链状DNA分子 |
| C、目前最常用的有质粒、噬菌体和动植物病毒 |
| D、作为运载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA分子进行鉴定和选择的标记基因 |
基因工程基本操作流程如图，请据图分析回答：将目的基因导入植物细胞的方法不包括（ ）
| A、农杆菌转化法 |
| B、显微注射法 |
| C、花粉管通道法 |
| D、基因枪法 |