Question

【题目】农作物收获后，燃烧秸秆会造成大气污染，如何回收利用是我国面临的一个重要问题。某同学设计从土壤中分离纤维素分解菌→分解秸秆，获得糖液→发酵生产乙醇，从而实现再次利用，请回答以下问题：

（1）将从土壤中获得的微生物培养在以___________为唯一碳源，并在加入___________染料的培养基上筛选周围有___________的菌落。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即___________和___________。

（3）某同学使用划线法分离纯化菌株，经一段时间培养，发现有的线上长满了菌，有的线上无菌落，造成这种情况的原因可能是划线操作时___________。

（4）发酵阶段需要的菌种是___________，在产生乙醇时要控制的必要条件是___________。

Answer 1

【答案】纤维素 刚果红 透明圈 平板划线法 稀释涂布平板法 接种环灼烧后未冷却 酵母菌 无氧（密闭或密封）

【解析】

1、刚果红染色法特指纤维素的染色法，刚果红能与纤维素形成红色复合物，对纤维二糖和葡萄糖无作用；在含有纤维素的培养基中加入刚果红，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法生形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，可用此来鉴别纤维素或纤维素分解菌的分解作用。

2、分离纤维素分解菌的实验流程是：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落。

3、纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少含有三种组分，即C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。

4、酵母菌在酒精发酵时一般将温度控制在18-25℃，需要进行无氧发酵。

（1）筛选纤维素分解菌时需要使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，鉴定纤维素分解菌时可以进入刚果红染液，在含有纤维素的培养基中加入刚果红，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法生形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。

（2）微生物纯化时常用的接种方法是平板划线法或稀释涂布平板法。

（3）平板划线法接种培养后，发现有的线上长满了菌，有的线上无菌落，可能的原因是接种环灼烧后未冷却烫死了菌种。

（4）糖液→发酵生产乙醇阶段需要的菌种是酵母菌，产生乙醇时要控制发酵温度在18-25℃，处于无氧条件。