Question

【题目】大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：

（1）利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7．0、浓度为20mmol/L的_______________到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_______蛋白质。

（2）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是____________________________。

（3）通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于_____（填“选择”或“鉴别”）培养基，蛋白胨的作用_______________。

②在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和_____________。

③某研究小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_____；

④滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是______。

Answer 1

【答案】磷酸缓冲液 甲 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果 鉴别 提供碳源、氨源、维生素 高压蒸汽灭菌 检测培养基平板灭菌是否合格 （当样品中细菌浓度低时）培养基表面生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌

【解析】

1、凝胶色谱法的原理是：小分子蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长、移动速度较慢，后被洗脱出来；而分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，路程较短，移动速度较快，先被洗脱出来。

2、大肠杆菌的代谢产物（有机酸）能与伊红-美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。

3、微生物培养基的主要成分包括碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。

（1）利用凝胶色谱法分离蛋白质时，所用的洗脱液是磷酸缓冲液；根据凝胶色谱法的原理可知，蛋白质相对分子质量较大的先洗脱出来，而实验结果是甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，说明相对分子质量较大的是甲蛋白质。

（2）由于气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，因此装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在。

（3）①根据以上分析已知，伊红-美蓝可以使得大肠杆菌菌落出现深紫色并带有金属光泽，说明伊红-美蓝培养基属于鉴别培养基，该培养基中蛋白胨可以为大肠杆菌提供提供碳源、氮源、维生素。

②在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌（湿热灭菌的一种）。

③在涂布接种前，为了检测培养基平板灭菌是否合格，需要随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间。

④滤膜法的原理是培养基表面生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌，所以根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数。