Question

13．请回答下列有关微生物培养和分离的问题．
（1）筛选石油分解菌一般要经过如下的步骤：海水取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到培养基上→挑选菌落，其中第二步的目的是增加石油分解菌浓度．
（2）培养微生物时，获得纯洁培养物的关键是无菌操作（防止杂菌污染）．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行．采用固体平板培养细菌时，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿倒置培养．
（3）在菌种保藏时，对于我们频繁使用的菌种一般采用临时保藏的方法，但这种方法有两个缺点：保存的时间不长；菌种易被污染或产生变异．
（4）做完实验将培养基倒掉之前，一定要进行灭菌处理．
（5）现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序，于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响结果如下表所示．
根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是EACBDG．

突变体\物质	培养基中加入的物质
1	A	B	C	D	E	G
1	-	-	-	+	-	+
2	-	+	-	+	-	+
3	-	-	-	-	-	+
4	-+	+	+	+	-	+
5		+	+	+	-	+

+，表示生长-，表示不生长．

Answer 1

分析 本题主要考查微生物的培养与应用的相关问题，利用选择培养基筛选出高效分解石油的细菌，其中涉及培养基的配置与选择，器具的灭菌方法，细菌分离纯化和保存的方法．

解答 解：（1）在实验室筛选所要的特定菌种一般步骤为海水取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到培养基上→挑选菌落，其中选择培养就是利用制成的富含石油选择培养基来培养细菌，以增加石油分解菌浓度．
（2）培养微生物时，获得纯洁培养物的关键是无菌操作（防止杂菌污染）．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行．采用固体平板培养细菌时，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿倒置培养．
（3）在菌种保藏时，对于我们频繁使用的菌种一般采用临时保藏的方法，但这种方法有两个缺点：保存的时间不长；菌种易被污染或产生变异．
（4）做完实验将培养基倒掉之前，一定要进行灭菌处理．
（5）由于题中给出G是必需的物质，在5种突变菌株中只要加入G，都可以活下来，则G必然是最后的产物；凡是只加了E的都没能存活，则E就是最开头的产物．加A物质，1、2、3、4均没有存活，说明A物质处于第二位；其他类推，C物质处于第三位，B物质处于第四位，D物质处于第五位，因此这几种物质的合成顺序应是E→A→C→B→D→G．
故答案为：
（1）选择培养     增加石油分解菌浓度
（2）无菌操作（防止杂菌污染）     酒精灯火焰       倒置
（3）保存的时间不长     菌种易被污染或产生变异
（4）灭菌         
（5）EACBDG

点评 本题主要考查微生物的培养与应用的相关问题，意在考查考生对微生物实验室分离培养的步骤的理解．