Question

【题目】酸奶、泡菜的制作都离不开乳酸菌，其代谢产物乳酸菌素（小分子蛋白质）和柚皮中的柚皮精油均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

（1）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌，分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。分离纯化乳酸菌时，首先需要用________对泡菜滤液进行梯度稀释，分离纯化时应挑选出_____________的菌落作为候选菌。若用稀释涂布平板法统计单位体积泡菜液中乳酸菌的数量，统计的菌落数往往比活菌的实际数目______，原因是_________________________________________________。

（2）通常不用水中蒸馏法提取柚皮精油，是因为_________________________________________，该过程得到的糊状液体可通过__________初步除去其中的固体物和残渣。

（3）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的____________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

Answer 1

【答案】无菌水 有透明圈 少 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 原料容易焦糊和有效成分会发生部分水解 过滤 大小（面积、直径、数量）

【解析】

结合题干信息，为了分离纯化乳酸菌，得到单菌落，防止杂菌感染，应用无菌水稀释，通过涂布平板法达到目的。在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用是中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸和利于乳酸菌的识别和分离；分离纯化时应挑选出在平板上有透明圈的菌落作为候选菌。水中蒸馏柚皮易发生焦糊现象，有效成分柠檬烯容易水解，常用压榨法提取柚皮精油。

（1）由于泡菜滤液中，乳酸菌的浓度过高，因此若直接培养难以得到单一菌落，进而影响后续实验效果。为了避免其他菌类影响实验效果，因此在进行泡菜滤液梯度稀释时应使用无菌水。乳酸菌代谢过程中产生的乳酸，乳酸会溶解选择培养基中碳酸钙而出现透明圈，所以分离纯化时应挑选出在平板上有透明圈的菌落作为候选菌。用稀释涂布平板法统计乳酸菌的数目，测得的数目是菌落数，而一个菌落可能是由一个活细胞或几个聚集在一起的活细胞增殖而成的群体。当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以用稀释涂布平板法统计单位体积泡菜液中乳酸菌的数量，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。

（2）水中蒸馏法容易导致原料焦糊和有效成分水解，如果利用水中蒸馏法柚皮易发生焦糊现象，而且有效成分柠檬烯容易水解，因此一般采用压榨法提取柚皮精油。可通过过滤法初步除去压榨液中的固体物和残渣。

（3）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，可通过测定以抑菌物质为中心的透明圈的大小来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果，透明圈越大，抑菌效果越好。