Question

【题目】牛支原体是严重危害牛养殖业的一种病原菌，它能引起肺炎、关节炎等多种疾病。VspX蛋白是牛支原体表面的一种脂蛋白，在牛支原体感染宿主细胞时起黏附作用。科研人员制备抗VspX单克隆抗体,并进行相关研究。

（1）将等量的纯化VspX蛋白作为_________分别注射到5只小鼠体内，经过二次免疫后测定小鼠抗VspX抗体的免疫效果，取其中免疫效果最好的1号小鼠用于后面的融合实验。

（2）在融合前三天，对1号小鼠加强免疫一次，目的是__________。然后取小鼠的脾脏细胞用_________试剂诱导与骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到__________。

（3）一段时间后，将（2）所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如下图。

①在检测时需要将VspX蛋白固定于固相载体表面制成_________，并加入多孔板培养槽中的_________（细胞、上清液），即待测样本。

②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将未与_________结合的酶标抗体洗去。

③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表_________。

（4）将上述细胞经_________酶处理，制成细胞悬液，除添加一般营养物质外，还需加入________，并置于_________中进行扩大培养，提取抗VspX单克隆抗体与不同抗原进行杂交检测，结果如下图

实验结果表明抗VspX单克隆抗体不能与3、4结合，具有很强的____________，可用于后续关于牛支原体所引发相关疾病__________等方面的研究。

Answer 1

【答案】抗原 刺激机体产生更多的浆细胞 PEG 杂交瘤细胞 固相抗原 上清液 抗VspX抗体 抗VspX抗体的量 胰蛋白 血清血浆 二氧化碳培养箱 特异性 诊断、治疗

【解析】

单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞。利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合。

单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞(A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞)，不需要A、B、AA、BB型细胞；第二次筛选：利用多孔板法和抗原-抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。

间接法测抗体，其基本原理：将特异性抗原包被在固相载体上，形成固相抗原，加入待测样本（含相应抗体），其中抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物，再加入酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体，亦称二抗），与上述抗原-抗体复合物结合。此时加入底物，复合物上的酶则催化底物而显色。

（1）VspX蛋白作为抗原注射到小鼠体内，使小鼠产生特异性免疫应答。

（2）为了使刺激机体产生更多的浆细胞，对1号小鼠加强免疫一次。然后用PEG（聚乙二醇）使小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，再通过选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。

（3）①将特异性抗原包被在固相载体上，故将VspX蛋白固定于固相载体表面制成固相抗原，并加入多孔板培养槽中的上清液，即待测样本（含相应抗体）。

②加入酶标抗体与上述抗原-抗体复合物结合，同时需要用洗涤剂将未与抗VspX抗体结合的酶标抗体洗去。

③加入相应酶促反应底物，复合物上的酶则催化底物而显色，颜色的深浅可代表抗VspX抗体的量。

（4）加入胰蛋白酶使细胞分散开，制成细胞悬液，培养动物细胞，除添加一般营养物质外，还需加入血清血浆，并置于二氧化碳培养箱中进行扩大培养。实验结果表明抗VspX单克隆抗体不能与3、4结合，具有很强的特异性，VspX单克隆抗体能与1、2结合可用于后续关于牛支原体所引发相关疾病诊断、治疗等方面的研究。