Question

6．血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的诱导肿瘤血管生成的最强烈的血锌生成因子，针对VEGF生产的抗肿瘤药物，是治疗癌症的一个方向．经研究和开发，现可利用转基因动物生产相关抗VEGF的单克隆抗体．请回答下列相关问题：
（1）转基因生物培育的首要条件是先获得目的基因，常用PCR技术在体外大量扩增；构建基因表达载体时需要的工具酶有限制酶和DNA连接酶，基因表达载体中标记基因的作用是鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞．
（2）在转基因动物的培育过程中，将目的基因导入受精卵常采用的方法是显微注射技术，体外培养受精卵时，培养液中提供CO₂的目的是维持培养液的pH．若将培养到囊胚期的胚胎进行分割，其操作过程中特别需要注意的问题是将内细胞团均等分割．
（3）单克隆抗体最主要的优点是特异性强，灵敏度高，并可大量制备；抗VEGF的单克隆抗体能定向攻击VEGF，利用的原理是抗原与抗体特异性结合．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高，并可能大量制备．
3、进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚，对囊胚阶段的胚胎进行分割时要注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．

解答 解：（1）PCR技术可在体外大量扩增目的基因；构建基因表达载体时，首先要用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，其次还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子；基因表达载体中标记基因的作用是鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞．
（2）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；体外培养受精卵时，培养液中提供CO₂的目的是维持培养液的pH．若将培养到囊胚期的胚胎进行分割，其操作过程中特别需要注意的问题是将内细胞团均等分割．
（3）单克隆抗体最主要的优点是特异性强，灵敏度高，并可大量制备；抗VEGF的单克隆抗体能定向攻击VEGF，利用的原理是抗原与抗体特异性结合．
故答案为：
（1）PCR     限制酶和DNA连接酶      鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞
（2）显微注射技术     维持培养液的pH        将内细胞团均等分割
（3）特异性强，灵敏度高，并可大量制备        抗原与抗体特异性结合

点评 本题考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具及操作步骤；识记单克隆抗体的优点；识记胚胎分割的特点及意义，能结合所学的知识准确答题．