Question

【题目】草甘膦是一种非选择性、无残留灭生性除草剂。科学家从土壤农杆菌变种CP4中分离到抗草甘膦酶的基因，并转移到无抗草甘膦的大豆中，从而得到新的大豆品种。请回答：

（1）在构建目的基因表达载体时，需用同种_________酶对含编码抗草甘膦酶基因的DNA和运载体进行酶切。

（2）基因表达载体除了带有抗草甘膦酶的基因以外，还必须含有启动子、终止子和_________等。

（3）请写出两种检测目的基因是否表达的方法：_________和_________。

（4）在检测进口大豆是否为转基因产品时，可用核酸探针进行检测。核酸探针可以用_________技术进行基因克隆，此克隆过程是利用_________的原理，利用该技术的前提是_________，需加入的酶是_________。

Answer 1

【答案】 限制性核酸内切 标记基因 抗原-抗体杂交法 喷施草甘膦溶液 PCR DNA复制 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 耐高温的DNA聚合（Taq）酶

【解析】试题分析：本题考查基因工程的相关知识，通过分析基因工程的原理、操作步骤，特别是各操作步骤中需要注意的细节以及PCR技术的相关知识，再结合题中信息能准确答题。

（1）构建基因表达载体时，需用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA。

（2）基因表达载体的组成包括目的基因（抗草甘膦酶的基因）、启动子、终止子和标记基因等。

（3）检测目的基因是否表达的方法：从分子水平上检测，可采用抗原-抗体杂交法；从个体水平上鉴定，可喷施草甘膦溶液，观察大豆的生存情况。

（4）基因克隆属于分子水平的克隆，可采用PCR技术，其原理是DNA复制；采用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列；PCR技术中有高温变性过程，因此需加入的酶是耐高温的DNA聚合（Taq）酶。